Search academic texts

Information × Registration Number 0416U005262, Candidate dissertation Status к.б.н. Date 26-09-2016 popup.evolution o Title The role of adapter protein Ruk/CIN85 in receptor dependent mechanisms of NADPH oxidase activation and intracellular signaling in tumor cells. Author Bazalii Andrii Viktorovich, popup.head Drobot Liudmyla Borysovna popup.opponent Матишевська Ольга Павлівна popup.opponent Філоненко Валерій Вікторович Description Об’єкт: молекулярні механізми контролю функціональної активності NADPH-оксидазного комплексу і редокс-залежного сигналювання. Мета: з’ясувати потенційну роль адаптерного протеїну Ruk/CIN85 у регулюванні функціональної активності NADPH-оксидаз та внутрішньоклітинного сигналювання в пухлинних клітинах. Методи: трансфекція клітин, визначення АФК хемілюмінесцентним методом з люмінолом, аналіз міграції з використанням модифікованої камери Бойдена, електрофорез протеїнів у ПААГ, Вестерн-блот аналіз, імунопреципітація, GST in vitro pull down аналіз, конфокальна прижиттєва мікроскопія. Продемонстровано існування регуляторного взаємозв’язку між рівнем експресії Ruk/CIN85 у пухлинних клітинах та інтенсивністю продукування АФК, залежного від функціонування NADPH-оксидаз. Отримано генетичні конструкції, що кодують внутрішньоклітинний біосенсор Н2О2, HyPer та злитий протеїн Ruk/CIN85-HyPer. З використанням прижиттєвої флуоресцентної мікроскопії продемонстровано співлокалізацію генерування Н2О2 та адаптерного протеїну Ruk/CIN85 у «dot»-подібних везикулярних структурах різних розмірів у тимчасово трансфікованих клітинах MCF-7. Показано, що попередня обробка клітин MCF-7 субклону G10 інгібітором збирання NADPH-оксидазного комплексу апоциніном і пасткою для АФК N-ацетилцистеїном призводить до реверсії тривалої активації кінази Akt на тимчасову з одночасним посиленням автофосфорилювання рецептора EGF та пригніченням клітинної міграції. Встановлено, що підвищене продукування АФК в клітинах MCF-7 із надекспресією адаптерного протеїну Ruk/CIN85 корелює з диференційними системними змінами у рівні експресії генів NOX. Registration Date 2016-09-26 popup.nrat_date 2020-04-03 Close