Search academic texts

Registration Number

0419U003158, Candidate dissertation

Title

Role of adaptor protein Ruk/CIN85 in the control of migration and invasion of cancer cells in vitro and in vivo

Author

Горак Ірина Романівна,

popup.head Drobot Liudmyla B.
popup.opponent Rynditch Alla V.
popup.opponent Garmanhuk Ludmila V.

Status

Кандидат біологічних наук, 03.00.04, Біохімія

Date

24-06-2019

Description

Дисертаційна робота присвячена дослідженню молекулярних механізмів, залежних від адаптерного протеїну Ruk/CIN85, що забезпечують контроль процесів міграції й інвазії пухлинних клітин на моделях in vitro та in vivo. Було одержано сублінії клітин аденокарциноми грудної залози миші лінії 4Т1 зі стабільною надекспресією та пригніченою експресією адаптерного протеїну Ruk/CIN85. Продемонстровано, що надекспресія адаптерного протеїну Ruk/CIN85 у клітинах лінії 4Т1 супроводжується зниженням їх проліферативного потенціалу та адгезивності й посиленням рухливості та інвазивності in vitro, тоді як пригнічення експресії Ruk/CIN85 у клітинах лінії 4Т1 спричиняє протилежно скеровані ефекти. Вперше охарактеризовано зміни транскриптому пухлинних клітин з різними рівнями експресії цього адаптера і виявлено, що Ruk/CIN85 модулює експресію низки генів, залучених до процесів міграції та інвазії, в тому числі віментину, Е-кадгерину, транскрипційних факторів Twist1, Snai1, Zeb1/2, матриксних металопротеїназ MMP-2, ММР-9, факторів репрограмування Klf4, Oct4, Nanog. Вперше показано, що рівень експресії Ruk/CIN85 негативно корелює з активністю матриксних металопротеїназ ММР-2 і ММР-9. Активація цих металопротеїназ супроводжується пригніченням інвазивності клітин лінії 4Т1 з пригніченою експресією Ruk/CIN85, ймовірно, за рахунок продукування ангіостатинів. Виявлено ознаки амебоїдного типу міграції у клітин 4Т1 з надекспресією Ruk/CIN85: пригнічення перицелюлярного протеолізу, округла форма клітин, наявність кортикального актинового кільця та вип’ячувань мембрани, підвищена активність і експресія лізилоксидази. Встановлено, що клітини лінії 4Т1 з надекспресією Ruk/CIN85 характеризуються посиленням прояву ознак ракових стовбурових клітин, таких як здатність до росту в неприкріпленому стані та самовідтворення, експресія специфічних поверхневих маркерів, підвищена резистентність до доксорубіцину. Надекспресія Ruk/CIN85 у клітинах лінії 4Т1 супроводжується посиленням їх здатності до екстравазування та метастазування в легені, тоді як down-регулювання Ruk/CIN85, навпаки, веде до практично повного пригнічення цих процесів. Встановлено, що в легеневих метастазах Ruk/CIN85 індукує мезенхімно-епітелійний перехід, асоційований з посиленням проліферативної активності пухлинних клітин. Одержані результати свідчать про те, що клітини з надекспресією Ruk/CIN85 характеризуються підвищеною епітелійно-мезенхімною/мезенхімно-амебоїдною пластичністю, яка й лежить в основі посиленої інвазивності й метастазування, тоді як клітини 4Т1 з пригніченням Ruk/CIN85 втрачають пластичність і перебувають у гомогенному епітелійному стані.