Search academic texts

Registration Number

0525U000494, Doctoral dissertation

Status

Доктор біологічних наук

Date

08-12-2025

popup.evolution

o

Title

Regulation of thrombin activity in normal and pathological conditions

Author

Daria S. Korolova, Кандидат біологічних наук

popup.advisor Serhiy V. Komisarenko
popup.opponent Serhii V. Dziadevych
popup.opponent Sergii O. Korol
popup.opponent Rostyslav S. Stoika
popup.review Tatiana O. Borisova
popup.review Denis V. Kolibo
popup.review Artem O. Tykhomyrov

Description

Дисертацію присвячено пошуку шляхів регуляції активності тромбіну в нормі та за патологічних станів. Методами in silico cтворено фокусну бібліотеку низькомолекулярних сполук – потенційних інгібіторів тромбіну. Сполуки синтезовано та апробовано у модельних системах in vitro, обрано найефективніші сполуки-кандидати, здатні конкурентно селективно та специфічно інгібувати активність тромбіну. В модельній системі in vivo показано, що досліджувані сполуки інгібують утворення фібриново-тромбоцитарного тромбу за рахунок пригнічення тромбінової активності при внутрішньовенному введенні тваринам. Тож, отримані інгібітори тромбіну можуть слугувати основою для створення антитромботичних засобів. Запропоновано активатор протромбіну з отрути Echis multisquamatus – екамулін – як універсальну основу для надання біоматеріалам кровоспинних властивостей за рахунок ефективної екстрасудинної генерації ендогенного тромбіну. В модельних системах in vitro (на збагаченій тромбоцитами плазмі крові) та in vivo (на моделі печінкової кровотечі у щурів) показано, що нековалентна модифікація екамуліном біоенертних, біоактивних та біорозкладних матеріалів надає їм кровоспинних властивостей. Створено рекомбінантний аналог активатора протромбіну, застосування якого може суттєво здешевити технологію. Шляхом поєднання кровоспинних властивостей активатора протромбіну та сорбційних властивостей активованих карбонових волокон було створено універсальний засіб для зупинки кровотеч – «Карбогемостат». Проведено доклінічні дослідження «Карбогемостату», які продемонстрували його безпечність. На базі КНП «Київський міський клінічний ендокринологічний центр» проведені клінічні випробування ефективності та безпечності «Карбогемостату» для зупинки кровотечі, які засвідчили безпечність та ефективність «Карбогемостату» навіть на фоні антикоагулянтної терапії. Поєднання колагенових матриць та активатора протромбіну дозволило створити кровоспинний засіб, що поєднує кровоспинну дію активатора з ранозагоювальними властивостями колагену та є здатним до біодеградації. Проведено доклінічні дослідження, які підтвердили безпечність та нетоксичність виробу, розпочато підготовку до клінічних випробувань. Показано можливість внесення додаткових антибактеріальних компонентів в склад модифікованої колагенової матриці та впроваджено в ветеринарну практику модифіковані активатором протромбіну колагенові матриці з додаванням повідон-йоду та цефтіофуру. Застосування активатора протромбіну дозволило розробити комплект для одержання аутологічного фібринового гелю, який володіє регенеративними властивостями. Проведено доклінічні дослідження, які підтвердили безпечність та нетоксичність виробу. Проведено успішні клінічні дослідження, на базі ТОВ «Мед Сервіс Консалтинг». Підлоскутне введення аутологічного фібринового гелю пацієнтам, яким проводилась тотальна циркулярна гемороїдектомія з лоскутною анопластикою, засвідчило високий ранозагоювальний потенціал та безпечність виробу. Запропоновано претромбін-1, як молекулярний маркер генерації активного тромбіну, та розроблено спосіб його кількісного визначення в плазмі крові. В основу методу покладено здатність екамуліну активувати як інтактний протромбін, так і претромбін-1, та здатність детектували лише інтактний протромбін в тромбопластиновому тесті. Спосіб визначення претромбіну-1 успішно впроваджено в лабораторну практику. Отримано моноклональні антитіла до протеїну С, що дало змогу створити імунодіагностичну тест-систему для його кількісного визначення у плазмі крові. Зниження рівню протеїну С, яке відбувається за рахунок його гідролізу тромбіном, запропоновано як маркер появи тромбіну в кровотоці. Удосконалено спосіб кількісного імунодіагностичного методу визначення концентрації розчинного фібрину в плазмі крові. Зокрема, розроблено умови для диференціації «ранніх» форм розчинного фібрину, тобто розчинного фібрину, що не піддавався гідролізу плазміногеном. На модельних системах LPS-індукованого запалення на мишах, інсуліно-резистентності та запалення, спричиненого радіаційним опроміненням, на щурах показано накопичення зазначених маркерів появи тромбіну в кровотоці за умов запалення. Показано діагностичну ефективність кількісного визначення претромбіну-1, протеїну С та розчинного фібрину для виявлення ризику тромбоутворення. Виявленно зв’язок клінічних проявів з появою цих маркерів внутрішньосудинного утворення тромбіну за ішемічної хвороби серця, ускладненої вагітності, системного червоного вовчака, операцій з приводу аневризми черевної аорти та ендопротезування кульшового суглобу, опікової травми, морбідного ожиріння, після перенесеного COVID-19. Обґрунтовано парадигму перемикання ензиматичної активності тромбіну між субстратами (протромбіном, фібриногеном, протеїном С), відповідно до стану ендотелію судин та зміни концентрації протромбіну та фібриногену.

Registration Date

2025-11-13

popup.nrat_date

2025-11-13