Search academic texts

Information × Registration Number 0512U000968, Doctoral dissertation Status д.б.н. Date 25-12-2012 popup.evolution o Title Myeloproliferative diseases: molecular pathogenesis and diagnostics Author Telegeev Gennady Dmitrievich, popup.opponent Дробот Людмила Борисівна popup.opponent Скляренко Лілія Михайлівна popup.opponent Філоненко Валерій Вікторович Description Роботу присвячено вивченню молекулярного патогенезу хронічної мієлоїдної лейкемії (ХМЛ) та розробці діагностичних і моніторингових методів мієлопроліферативних неоплазм. Запропоновано новий підхід до виявлення та диференційної діагностики Ph-позитивних лейкемій, який дозволяє виявляти як класичні, так і можливі неканонічні типи перебудов в bcr ділянці химерного гена bcr-abl. Запропоновано тест - системи для виявлення bcr-abl перебудови, мутації в Abl-кіназному домені та мутації V617F при МПЗ. За допомогою зворотно - транкриптазної полімеразної ланцюгової реакції показано , що у деяких хворих на ГЛЛ та ХМЛ з p210 bcr-abl мРНК на гострій стадії захворювання відбувається втрата різних за протяжністю ділянок DH домену. Описано 7 нових варіантів химерної bcr-abl мРНК. Проаналізовано наслідки виявлених змін на характер функціонування білка. Зокрема, на актиновий цитоскелет полімофноядерних лейкоцитів, де спостерігається різне клітинне розташування: дифузійне, кортикальне та "dot-like" розташування (у хворого з бластною кризою). З метою дослідження наявності та рівня експресії нормального білка Bcr нами було проекспресовано, очищено і використано для отримання поліклональних антитіл рекомбінантні DH та PH домени Bcr. Результати Вестерн-блот аналізу з використанням лізатів клітин хворих на ХМЛ свідчать про наявність зворотного негативного зв'язку між експресією білків Bcr та Bcr-Abl. Отримані антитіла дають змогу детектувати нормальний білок Bcr і дозволяють розробити комплексний підхід для детекції bcr-abl - перебудови. Клоновано ділянки гена bcr, що відповідають DH і PH доменам, а також тандему DHPH білка Bcr та отримано рекомбінантні білки DH, РН і DHPH. Вперше проведено дослідження GEF - активності DH домену Bcr окремо і разом з РН доменом методом "pull down" - аналізу. Показано, що в нього відсутня GEF - активність щодо Rho-ГТФаз підкласів RhoA, Cdc42 і Rac1 in vitro і in vivo. Визначено ліпіди, що зв'язуються з РН доменом Bcr з високою афінністю. Методами "pull down", двовимірного електрофорезу і мас-спектрометрії вперше показано взаємодію РН домену Bcr з білками, підтверджено зв'язування з білками SMC1, тубулін, зизимін1, PLC. Показано вплив РН домену на субклітинну локалізацію білка Bcr-Abl. Ключові слова: Bcr-Abl, DH домен, PH домен, хронічна мієлоїдна лейкемія, ХМЛ, гостра лімфобластна лейкемія, ГЛЛ, ген bcr-abl, jak 2 ген, діагностика. Registration Date 2012-12-25 popup.nrat_date 2020-04-04 Close