Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0512U000968, Докторська дисертація На здобуття д.б.н. Дата захисту 25-12-2012 Статус Запланована Назва роботи Мієлопролифератівні захворювання: молекулярний патогенез та діагностіка Здобувач Телегєєв Геннадій Дмитрович, Опонент Дробот Людмила Борисівна Опонент Скляренко Лілія Михайлівна Опонент Філоненко Валерій Вікторович Опис Роботу присвячено вивченню молекулярного патогенезу хронічної мієлоїдної лейкемії (ХМЛ) та розробці діагностичних і моніторингових методів мієлопроліферативних неоплазм. Запропоновано новий підхід до виявлення та диференційної діагностики Ph-позитивних лейкемій, який дозволяє виявляти як класичні, так і можливі неканонічні типи перебудов в bcr ділянці химерного гена bcr-abl. Запропоновано тест - системи для виявлення bcr-abl перебудови, мутації в Abl-кіназному домені та мутації V617F при МПЗ. За допомогою зворотно - транкриптазної полімеразної ланцюгової реакції показано , що у деяких хворих на ГЛЛ та ХМЛ з p210 bcr-abl мРНК на гострій стадії захворювання відбувається втрата різних за протяжністю ділянок DH домену. Описано 7 нових варіантів химерної bcr-abl мРНК. Проаналізовано наслідки виявлених змін на характер функціонування білка. Зокрема, на актиновий цитоскелет полімофноядерних лейкоцитів, де спостерігається різне клітинне розташування: дифузійне, кортикальне та "dot-like" розташування (у хворого з бластною кризою). З метою дослідження наявності та рівня експресії нормального білка Bcr нами було проекспресовано, очищено і використано для отримання поліклональних антитіл рекомбінантні DH та PH домени Bcr. Результати Вестерн-блот аналізу з використанням лізатів клітин хворих на ХМЛ свідчать про наявність зворотного негативного зв'язку між експресією білків Bcr та Bcr-Abl. Отримані антитіла дають змогу детектувати нормальний білок Bcr і дозволяють розробити комплексний підхід для детекції bcr-abl - перебудови. Клоновано ділянки гена bcr, що відповідають DH і PH доменам, а також тандему DHPH білка Bcr та отримано рекомбінантні білки DH, РН і DHPH. Вперше проведено дослідження GEF - активності DH домену Bcr окремо і разом з РН доменом методом "pull down" - аналізу. Показано, що в нього відсутня GEF - активність щодо Rho-ГТФаз підкласів RhoA, Cdc42 і Rac1 in vitro і in vivo. Визначено ліпіди, що зв'язуються з РН доменом Bcr з високою афінністю. Методами "pull down", двовимірного електрофорезу і мас-спектрометрії вперше показано взаємодію РН домену Bcr з білками, підтверджено зв'язування з білками SMC1, тубулін, зизимін1, PLC. Показано вплив РН домену на субклітинну локалізацію білка Bcr-Abl. Ключові слова: Bcr-Abl, DH домен, PH домен, хронічна мієлоїдна лейкемія, ХМЛ, гостра лімфобластна лейкемія, ГЛЛ, ген bcr-abl, jak 2 ген, діагностика. Дата реєстрації 2012-12-25 Додано в НРАТ 2020-04-04 Закрити