Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0211U013054, 0110U006325 , Науково-дослідна робота Назва роботи Дослідження селективної автофагійної деградації органел та цитозольних білків у дріжджів Pichia pastoris та Saccharomyces cerevisiae Назва етапу роботи Керівник роботи Сибірний Андрій Андрійович, Дата реєстрації 28-05-2012 Організація виконавець Iнститут біології клітини НАН України Опис етапу На даному етапі було заплановано підібрати умови для дослідження пексофагії у дріжджів Saccharomyces cerevisiae на чашках, інсерційний мутагенез дикого типу цього виду дріжджів та пошук потенційних atg мутантів. На попередьому етапі роботи нами було сконструйовано вектор, що містить ген бета-галактозидази (LacZ) із послідовністю ДНК, що кодує сигнальний трипептид SKL (cерин-лізин-лейцин) на її С-кінці для доставки білка у пероксисоми під промотором гена FOX3. За допомогою тесту на чашках із мінімальним середовищем із олеатом та X-gal показано, що білок експресується на олеаті та володіє ферментативною активністю. На даному етапі роботи за допомогою світлової мікроскопії показано, що гібридний білок LacZ-SKL на олеатному середовищі з X-gal локалізується у пероксисомах. Підібрано умови для успішної інактивації та деградації даного фермента після перенесення штаму із олеатного середовища з X-gal на глюкозне середовище без джерела азоту з X-gal. Проведено інсерційний мутагенез дикого типу, що містить PFOX3-LacZ-SKL та, використовуючи розроблені умови, відібрано мутанти, що характеризуються пошкодженням інактивації / деградації цього фермента, що може свідчити про пошкодження деградації пероксисом у них. Опис продукції Розроблено спрощений метод селекції автофагійних мутантів у дріжджів S. cerevisiae та проведено інсерційний мутагенез та відібрано 2 потенційних atg мутанти Автори роботи Назарко Володмир Юрійович Полупанов Андрій Сергійович Сибірний Андрій Андрійович Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити