Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0218U000724, 0113U002496 , Науково-дослідна робота Назва роботи Імуносенсорний експресс-аналізатор на основі поверхневого плазмонного резонансу для кількісного визначення маркерів системи гемостазу для медицини і ветеринарії: метрологічне забезпечення та дослідна експлуатація. Назва етапу роботи Керівник роботи Комісаренко Сергій Васильович, Доктор біологічних наук Дата реєстрації 12-02-2018 Організація виконавець Інститут біохімії ім. О.В.Палладіна НАН України Опис етапу В процесі дослідної експлуатації діючого макету ППР експрес-аналізатора маркерів системи гемостазу було удосконалено двохканальну імуносенсорну камеру, оптимізовано метод нанесення золотого покриття на чіп, охарактеризовано елементний склад і структуру золотої плівки, оптимізовано способи формування самоупорядкованого моношару (SAM) з коротко-ланцюгових тіосполук - меркаптоетанолу і меркаптоетиламіну, оптимізовано метод функціоналізації поверхні золотої пластинки чіпа з використанням карбоксиметилдекстрану, відпрацьовано технологію приготування фібрин(оген)- специфічних імуносенсорних чипів на основі мАт, розроблених в Інституті біохімії ім. О .В. Палладіна НАН України, для визначення фібриногену, фібрину і D -димеру в плазмі крові і модельних системах із очищених білків;, відпрацьовано технологію визначення маркерів системи гемостазу, яка включає приготування зразків плазми крові для аналізу шляхом розбавлення в буфері, що містить інгібітори полімеризації фібрину, коктейль інгібіторів протеолітичних ферментів, і регенерації робочої поверхні імуносенсорного чіпа; отримано калібрувальні криві для визначення концентрації фібриногену і фібрину в плазмі крові людини, визначено концентрацію фібриногену і фібрину в плазмі крові і в модельній системі із очищених білків. Розроблено методи приготування білків-калібраторів для побудови калібрувальних кривих. Знайдено, що застосування фториду натрію замість хлориду натрію вдвічі збільшує відповідь сенсора на зв'язування фібрину з моноклональними антитілами. Для підвищення чутливості імунобіосенсора були розроблені і охарактеризовані селективні наночастинки золота, кон'юговані з GPRP пептидом (НЧЗ-GPRP), який являє собою сайт полімеризації фібрину. Знайдено, що НЧЗ-GPRP підсилювали на порядок величину відповіді фібрин(оген)-специфічного імунобіосенсора. Дослідна експлуатація ППР експрес-аналізатора як нового методу вивчення в реальному часі процесу тромбін-залежної трансформації фібриногену у фібрин і механізму формування фібринового згустку - основи тромбу, дозволила встановити, що швидкість трансформації фібриногену в фібрин після відщеплення фібринопептиду А тромбіном регулюється іонами Cl; зв'язування пептидів з мАт I-3c однозначно вказує на ділянку 126-135 B?-ланцюга фібрину, як на сайт на молекулі фібрину, залучений у латеральну асоціацію протофібрил; ділянка, в якій спостерігаються конформаційні зміни, охоплює 123-135 амінокислотні залишки В?-ланцюга молекули; пептиди, які моделюють амінокислотні послідовності в шарнірній ділянці фібрину і блокують латеральну асоціацію протофібрил фібрину, зв'язуються з монАт I-3c, епітоп якого локалізовано також в шарнірній ділянці фібрину. Розроблено метод визначення кінетичних параметрів реакцій взаємодії "антиген-антитіло" (ka, kd і Kd) для аналізу окремих сенсограм, отриманих із застосуванням ППР-спектророполяриметра "Плазмон-6". Проведено аналіз сенсограм зв'язування фібриногену з монАТ II-4d та фібрину дезАВ з монАТ I-3c у системі з очищених білків і у плазмі крові, а також X-фрагментів фібрину дезAB з монАТ I-3c у системі з очищених білків, та обчислено кінетичні параметри для досліджуваних реакцій асоціації. У співпраці з ІФН ім. В.Є. Лашкарьова НАН України розроблена програма "Itera" для автоматизованого кількісного визначення кінетичних параметрів зв'язування маркерів системи гемостазу у зразках плазми крові на основі аналізу сенсорограми приладу. Опис продукції Імуносенсорні біочипи на основі ковалентно імобілізованих специфічних анти-фібринових, анти-фібриногенових монАТ, анти-Д-димерних моноклональних антитіл і білків плазми крові, придатні для роботи з ППР спектрометрами серії Плазмон. На їх основі створено макет імуносенсорного портативного ППР експрес-аналізатору для методу кількісного і швидкого визначення в плазмі крові пацієнтів розчинного фібриногену, фібрину, Д-димеру, що дозволить виявляти ризики тромбозів при різних захворюваннях та проводити моніторинг лікування цих порушень. Розроблено новий методичний підхід для вивчення молекулярних процесів полімеризації фібриногену та взаємодії тромбоцитів з білками крові і стінок судин, що лежать в основі тромбоутворення. Автори роботи Березницький Г.К. Гоголінська Г.К. Колеснікова І.М. Костюченко О.П. Луговський Е. В. Макогоненко Є. М. Назаренко В.І. Урвант Л. П. Ушенін Ю. В. Чернишенко В.О. Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити