Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0222U000895, 0120U104114 , Науково-дослідна робота Назва роботи Створення дріжджових продуцентів нових флавінових антибіотиків Назва етапу роботи Керівник роботи Дмитрук Костянтин Васильович, Доктор біологічних наук Дата реєстрації 21-01-2022 Організація виконавець Інститут біології клітини Національної академії наук України Опис етапу  РЕФЕРАТ Звіт про НДР: 86 с., 47 рис., 54 джерело. Об’єкт дослідження: процес біосинтезу амінорибофлавіну та розеофлавнуз рибофлавіну та флавінмононуклеотиду. Мета дослідження: конструювання рекомбінантних штамів дріжджів Сandida famata, здатних до надпродукції антибіотиків амінорибофлавіну та розеофлавіну. Методи дослідження: генно-інженерні, мікробіологічні, біохімічні, біоінформатичного аналізу. Розроблено систему мультикопійної інтеграції цільових послідовностей ДНК в геном дріжджів Сandida famata, оптимізовано CRISPR-Cas9 систему для С. famata, проведено дизайн генів rosB, rosA та та rosC S. davaonensis, сконструйовано плазміди для мультикопійної інтеграції, що містять адаптовані гени rosB, rosA та rosC під контролем сильного промотора. Отримані плазміди були використані для селекції штамів дріжджів С. famata з посиленою експресією відповідних генів. Сконструйовано продуцент амінорибофлавіну на основі дріжджів С. famata здатний до надсинтезу ФМН шляхом посилення експресії гена rosB. Хроматографічний та масспектрометричний аналіз виявив амінорибофлавін, що нагромаджував рекомбінантний штам у культуральному середовищі у концентрації 5,2 мг/л. Сконструйовано штам Pichia pastoris з посиленою експресією генів FMN1, rosB, rosA та rosC здатний до продукції розеофлавіну у концентрації 3 мг/л. Розроблено схему виділення та очищення амінорибофлавіну та розеофлавіну з культуральної рідини сконструйованих штамів та отримано препаративні кількості цих антибіотиків. Підібрано умови культивування для сконструйованих штамів для максимального нагромадження цих антибіотиків. Оптимізовано умови культивування продуцента розеофлавіну у ферментері. За умов культивування у лабораторному ферментері об’ємом 1 л, рекомбінантний штам P. pastoris продукував 46 мг/л розеофлавіну. Ключові слова: генна інженерія, дріжджі, Candida famata, Pichia pastoris розеофлавін, амінорибофлавін, Streptomyces davaonensis, гени FMN1, rosB, rosА, Опис продукції Автори роботи Андреєва Юлія Андріївна Дмитрук Олена Валеріївна Петровська Яна Олександрівна Сибірний Андрій Андрійович Фаюра Любов Романівна Федорович Дарія Василівна Додано в НРАТ 2022-03-09 Закрити