Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0222U003722, 0120U104112 , Науково-дослідна робота Назва роботи Розробка вакцини проти SARS-CoV-2 на основі експресії фрагментів білка S у дріжджів та вивчення імунної відповіді у лабораторних тварин Назва етапу роботи Керівник роботи Сибірний Андрій Андрійович, Доктор біологічних наук Дата реєстрації 25-05-2022 Організація виконавець Інститут біології клітини Національної академії наук України Опис етапу В результаті виконання НДР на основі «гуманізованих» штамів дріжджів K. phaffii та O. polymorpha отримано колекцію трансформантів, що містять в своєму геномі касети експресії фрагментів субодиниць S1 та S2 глікопротеїна «шипа» SARS-CoV-2 під контролем промотора гена AOX1, що індукується метанолом. Встановлено, що фрагменти «шипа» з N-кінцевим α-фактором не здатні до секреції в культуральне середовище. Цільові білки акумулювалися в нерозчинній мембранній фракції безклітинних екстрактів. Для виділення відповідних білків було використано низку детергентів, найбільш ефективним виявився гуанідин гідрохлорид. Оскільки процес очищення білків з нерозчинних мембранних фракцій виявився низькоефективним, було також сконструйовано штами K. phaffii та O. polymorpha, що продукують RBD з фланкуючими лінкерними ділянками, багатими на амінокислоти гліцин та серин. Цей варіант RBD секретується у культуральне середовище і може бути легко очищений без використання детергентів. Також сконструйовано рекомбінантні штами K. phaffii, що містять NTD-RBD фрагмент S білка, M- та E-білки SARS-CoV2 і малий S білок (dS, білок риштування) вірусу гепатиту качки для збирання вірусоподібних частинок SARS-CoV2. Електронна мікроскопія показала наявність в клітинах дріжджів структур розміром близько 20 нм. З таких дріжджових клітин було отримано ацетонові порошки та зразки з інактивованими прогріванням клітинам з подальшою ліофілізацією. Проведено експерименти на мишах, для оцінки переносимості та імуногенності отриманих препаратів, а також на клітинній лінії Vero із зараженням її вірусом SARS-CoV2. Найбільш ефективними виявилися препарат білка FP-HR1-HR2, очищеного з клітин рекомбінантного штаму K. phaffii та ацетонові порошки з клітин дріжджів K. phaffii, що містять вірусоподібні частинки SARS-CoV-2. Опис продукції Автори роботи Василишин Роксолана Василівна Дмитрук Костянтин Васильович Зазуля Анастасія Зіновіївна Семків Марта Віталіївна Фаюра Любов Романівна Федорович Дарія Василівна Додано в НРАТ 2022-05-25 Закрити