Пошук академічних текстів

Реєстраційний номер

0215U003221, Науково-дослідна робота

Назва роботи

Визначення ролі генетичних та епігенетичних змін в геномі соматичних клітин у патогенезі хронічних лімфопроліферативних захворювань, їх діагностичної та прогностичної значущості

Керівник роботи

Бебешко Володимир Григорович; Мінченко Жанна Миколаївна,

Дата реєстрації

21-01-2015

Організація виконавець

Державна установа "Національний науковий центр радіаційної медицини Національної академії медичних наук України"

Опис

Об'єкт дослідження - біологічний матеріал 107 хворих на множинну мієлому, хронічну лімфоцитарну лейкемію, неходжкінську злоякісну лімфому. Мета роботи - вивчити епігенетичний статус генів регуляторів клітинного циклу й продукції цитокінів та провести аналіз фрагментів реаранжування генів важких ланцюгів імуноглобулінів у хворих на хронічні лімфопроліферативні захворювання. Методи дослідження - молекулярно-цитогенетичні, цитогенетичні, імуногенетичні, імунологічні, гематологічні, культуральні та статистичні. Результати досліджень. При молекулярно-цитогенетичному дослідженні клітин кісткового мозку, лімфатичних вузлів та периферичної крові хворих на ХЛПН, аномалії хромосоми 17 в локусі гену ТР 53 були виявлені у 36 із 107 (34 %) хворих на ХЛПН. Найчастіше визначалась клональна делеція гену ТР 53. Гіперанеуплоїдії хромосоми 17 реєструвалися у 14 % хворих на ХЛПН. У 49 (46 %) хворих зміни генетичних структур не зареєстровані. У хворих на В-ХЛЛ транслокації t(4;14), t(11;14) генів FGFR3 та CCND1 не виявлено. IGH анеуплоїдії були ідентифіковані у 4 хворих із 10. У 67 хворих на ММ транслокація t(11;14) зареєстрована у 3 випадках. Ретроспективне дослідження 17 парафінізованих зразків біопсійного матеріалу лімфатичних вузлів хворих на ДКВЛ і трьох зразків - хворих на ЛБ показало, що MYC перебудови реєструвались за лімфоми Беркітта у двох із трьох хворих. У хворих на ДКВЛ транслокація t(8; 14) визначалась у двох із сімнадцяти хворих. У шести із двадцяти пацієнтів зареєстровані анеуплоїдії хромосом 8 та 14. Підтверджена необхідність визначення диференційно-прогностичних маркерів перебігу захворювання, в тому числі і хромосомних перебудов. Показано, що за ММ факторами генетичної схильності до захворювання є присутність в HLA-генотипі алелей HLA-A*24; HLA-B*52; HLA-C*06; HLA-DRB1*08; HLA-DQB1*05 та HLA-DQB1*06. Алель HLA-A*01 має протективну функцію. Було здійснено підбір праймерів з оптимальною кількістю CG динуклеотидів, розташованих переважно в промоторних ділянках цих генів. Паттерн метилювання генів CCND1, TNF-альфа та IGHJ1 в геномній ДНК хворих відповідав референсній ДНК, змін не виявлено. Доведено, що до початку ХТ у пацієнтів із ММ концентрація ІЛ-6 і ФНП-альфа в сироватці ПК значно перевищувала показники здорових осіб. Найбільш високі концентрації ФНП- альфа та ІЛ-6 в сироватці ПК визначені у хворих на ММ з резистентністю до ХТ. Результати дослідження КУО-Ф кісткового мозку хворих на ММ виявили, що кількість КУО-Ф при множинній мієломі залежить від форми і стадії захворювання.

Опис продукції

За результатми НДР запропонована оригінальний дизайн праймерів для аналізу нуклеотидної послідовності та патерну метилювання генів CCND1, TNF-альфа та IGHJ1 з урахуванням вимог щодо аналізу епігенетичних процесів в геномі людини. Були визначені ділянки послідовності ДНК, які чітко відповідали визначеним критеріям, а саме - мали більше 60% С і G від загального числа нуклеотидів, а співвідношення СG і GС динуклеотидів складало не менше 0,6. Це дозволить провести коректний облік результатів та зменшить ризик помилкової детекції хибно-позитивних або негативних результатів.