Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0216U002458, 0113U000142 , Науково-дослідна робота Назва роботи Розробка нових біоаналітичних методів визначення вмісту L- і D-лактату та L-аргініну для діагностики деяких захворювань, контролю їх перебігу. Назва етапу роботи Керівник роботи Гончар Михайло Васильович, Кандидат педагогічних наук Дата реєстрації 16-03-2016 Організація виконавець Iнститут біології клітини НАН України Опис етапу Об'єкт дослідження: ферменти біоаналітичного значення, біосенсорний аналіз, флуоресцентний аналіз, ензиматичний аналіз, L- лактат, D-лактат, L-аргінін, біологічні зразки. Мета роботи: розробити нові біоаналітичні методи для кількісного визначення деяких біомаркерів, важливих для клінічної діагностики та спортивної медицини (на прикладі L- і D-лактату) і контролю процесу ензимотерапії (на моделі L-аргініну - мішені дії аргініно-гідролізуючих рекомбінантних ферментів - аргінази І та аргініндезамінази). Методи дослідження: мікробіологічні, біохімічні, фізико-хімічні, ензиматичні, біосенсорні. У результаті проведеної роботи: - створено 2 варіанти ензимо-флуоресцентного методу аналізу вмісту L-аргініну - моноензимний та двоензимний. Запропоновані методи базуються, відповідно: 1) на детекції флуоресценції продукту аргіназної реакції розкладу L-аргініну - карбаміду - при взаємодії з 2,3-бутандіонмонооксимом; 2) на моніторингу флуоресценції аргіназно-уреазного продукту гідролізу L-аргініну - йонів амонію - у реакції з орто-фталевим альдегідом. Показано можливість використання розроблених біоаналітичних методів для аналізу L-аргініну в реальних зразках фармацевтичних препаратів та біологічних рідин; - розроблено біосенсорний метод аналізу L-аргініну за використання рекомбінантної аргініндеімінази бактерії Mycoplasma hоminis, який ґрунтується на моноферментній конверсії L-аргініну до цитруліну та амонію і амперометричній детекції йонів амонію за допомогою хемосенсорного шару на основі комплексу поліанілін-Нафіон; - оптимізовано препаративне виділення флавоцитохрому b2 із клітин рекомбінантного штама-продуцента - метилотрофних дріжджів Ogataea polymorpha (Hansenula polymorpha), іммобілізовано фермент на наноносіях різної природи та опрацюванно протоколи неінвазійних ензиматичних методів визначення вмісту L-лактату в біологічних рідинах людини (поті, слині); - створено мікробні електроди на основі рекомбінантних клітин дріжджів Ogataea polymorpha tr6 (delta CYB2 pAOX-DLD1), здатних до надпродукції дегідрогенази D-лактату, клітинних уламків, мітохондрій та різних носіїв і медіаторів електронного переносу; - розроблено прототип D-лактат-селективного сенсора, який демонструє високу селективність до D-лактату і нечутливість до інтерферуючого впливу з боку супутніх у реальних зразках речовин - етанолу, глюкози, пірувату чи L-лактату; - вивчено можливість використання пермеабілізованих клітини H. polymorpha tr6 та субклітинних фракцій, збагачених мітохондріями (як джерело дегідрогенази D-лактату), у фотометричному аналізі D-лактату на основі утворення розчинної форми "Берлінської блакиті" (з фериціанідом) та формазану (з нітротетразолієвим синім); - сконструйовано модельний колонковий біореактор на основі клітин продуцентів L- та D-лактат-специфічних оксидоредуктаз, іммобілізованих в кальцій-альгінатному гелі, для отримання D-лактату із рацемату молочної кислоти та усунення токсичного D-лактату із модельних сумішей молочно-кислих продуктів. За результатами НДР у 2013-2015 р.р. опубліковано 100 робіт, із них статей - 34 (23 - міжнародних), 7 розділів в англомовних монографіях, 3 методичні посібники, 1 патент України на винахід, а також 55 тез доповідей. Опис продукції Біоаналітичні методи на основі ферментів та генетично модифікованих клітин, іммобілізованих на мікро- та нанорозмірних носіях. Автори роботи Іваш М. Ф. Гайда А. В. Гайда Г. З. Демків О. М. Закальська О. М. Закальський А.Є. Куцяба В. І. Лаврик М. І. Нечай Г. І. Прокопів Т. М. Серкіз Р. Я. Синенька М. М. Смуток О. В. Стасюк Н. Є. Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити