Registration Number
0420U101636, Candidate dissertation
Status
Кандидат біологічних наук
Date
22-09-2020
popup.evolution
.
Title
Expression and Spatial Distribution of the Neuronal Calcium
Sensor Protein Hippocalcin in Subcellular Compartments
Author
Sheremet Yevgeniy Yu,
popup.head Bilan Pavlo V.
popup.opponent Solovyov Anatoliy I.
popup.opponent Syvolob Andriy V.
popup.rada
Bogomoletz Institute of Physiology National of science of Ukraine
Description
Гиппокальцин – нейронный Ca2+-сенсорный белок (NCS), который опосредует
внутриклеточные сигнальные пути благодаря своей способности к Ca2+-зависимой
22
транслокации из цитозоля на плазматическую мембрану. Несмотря на то, что
подобная транслокация гиппокальцина и других NCS-белков достаточно хорошо
изучена, никаких количественных оценок распределения гиппокальцина между
цитозолем и плазматической мембраной при базальном уровне внутриклеточной
концентрации свободных ионов кальция ([Ca2+]i) получено не было. В этой работе мы
предложили простые и универсальные подходы для таких оценок. Мы показали, что
уровень экспрессии экзогенного гиппокальцина (10 мкМ) в исследуемых нейронах
гиппокампа по крайней мере втрое ниже по сравнению с концентрацией эндогенного.
Таким образом, экзогенный белок можно использовать в качестве инструмента
визуализации распределения, транслокации и взаимодействия гиппокальцина с
белками-мишенями без существенного влияния на эндогенную сигнализацию
гиппокальцина. Используя метод восстановления флуоресценции после
фотовыцветания (FRAP), мы показали, что коэффициент диффузии флуоресцентно
меченого гиппокальцина в дендритах нейронов гиппокампа (~40 мкм/с) находится в
пределах диапазона значений, характерных для цитозольных белков, причем
коэффициент был примерно в 10 раз больше, чем для чисто мембранного белка. Оба
эти результаты свидетельствуют о том, что гиппокальцин находится в основном в
цитозоле дендритов нейронов гиппокампа. Прямое вычисление фракционного
распределения гиппокальцина на базальном уровне [Ca2+]i показали, что мембранная
фракция гиппокальцина не превышает 8%. В целом, наши результаты говорят о том,
что, будучи преимущественно цитозольным, гиппокальцин может умеренно
активировать свои мембранные белки-мишени даже в условиях покоя.
Registration Date
2020-09-28
popup.nrat_date
2021-03-17 / 2026-06-30
