Реєстраційний номер
0420U101636, Кандидатська дисертація
На здобуття
Кандидат біологічних наук
Дата захисту
22-09-2020
Статус
Захищена
Назва роботи
Експресія та просторовий розподіл нейронного кальцієвого сенсорного білка гіпокальцину в субклітинних компартментах.
Здобувач
Шеремет Євгеній Юрійович,
Керівник Білан Павло Володимирович
Опонент Соловйов Анатолій Іванович
Опонент Сиволоб Андрій Володимирович
Установа, організація, у вченій раді якої відбудеться/відбувся захист
Інститут фізіології ім. Богомольця Національна академія наук України
Опис
Гиппокальцин – нейронный Ca2+-сенсорный белок (NCS), который опосредует
внутриклеточные сигнальные пути благодаря своей способности к Ca2+-зависимой
22
транслокации из цитозоля на плазматическую мембрану. Несмотря на то, что
подобная транслокация гиппокальцина и других NCS-белков достаточно хорошо
изучена, никаких количественных оценок распределения гиппокальцина между
цитозолем и плазматической мембраной при базальном уровне внутриклеточной
концентрации свободных ионов кальция ([Ca2+]i) получено не было. В этой работе мы
предложили простые и универсальные подходы для таких оценок. Мы показали, что
уровень экспрессии экзогенного гиппокальцина (10 мкМ) в исследуемых нейронах
гиппокампа по крайней мере втрое ниже по сравнению с концентрацией эндогенного.
Таким образом, экзогенный белок можно использовать в качестве инструмента
визуализации распределения, транслокации и взаимодействия гиппокальцина с
белками-мишенями без существенного влияния на эндогенную сигнализацию
гиппокальцина. Используя метод восстановления флуоресценции после
фотовыцветания (FRAP), мы показали, что коэффициент диффузии флуоресцентно
меченого гиппокальцина в дендритах нейронов гиппокампа (~40 мкм/с) находится в
пределах диапазона значений, характерных для цитозольных белков, причем
коэффициент был примерно в 10 раз больше, чем для чисто мембранного белка. Оба
эти результаты свидетельствуют о том, что гиппокальцин находится в основном в
цитозоле дендритов нейронов гиппокампа. Прямое вычисление фракционного
распределения гиппокальцина на базальном уровне [Ca2+]i показали, что мембранная
фракция гиппокальцина не превышает 8%. В целом, наши результаты говорят о том,
что, будучи преимущественно цитозольным, гиппокальцин может умеренно
активировать свои мембранные белки-мишени даже в условиях покоя.
Дата реєстрації
2020-09-28
Додано/оновлено в НРАТ
2021-03-17 / 2026-06-30
