Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0511U000932, Докторська дисертація На здобуття д.мед.н. Дата захисту 17-11-2011 Статус Запланована Назва роботи Значення антигенної мімікрії в серологічній діагностиці ВІЛ-інфекції Здобувач Іванська Наіля Валєєвна, Опонент Криворутченко Юрій Леонідович Опонент Руденко Адель Вікторівна Опонент Швед Анатолій Давидович Опис 1. Об'єкт дослідження:явище антигенної мімікрії в серологічній діагностиці СНІДу, хибно-позитивні реакції при виявленні антитіл до ВІЛ. Мета: визначити роль антигенної мімікрії в отриманні хибно-позитивних результатів при серологічній діагностиці ВІЛ-інфекції та розробити методичні підходи до підвищення її ефективності. Методи: комплекс мікробіологічних, вірусологічних, молекулярно-біологічних, біохімічних, імунологічних і статистичних методів досліджень. Теоретичні і практичні результати: представлено теоретичне узагальнення та обґрунтовано практичне вирішення актуальної проблеми - вдосконалення серологічної діагностики ВІЛ-інфекції за рахунок визначення ролі антигенної мімікрії в отриманні хибно-позитивних результатів при використанні імуноферментних тест-систем для виявлення антитіл до ВІЛ. Встановлено, що хибно-позитивні результати при виявленні антитіл до ВІЛ у хворих на діабет, туберкульоз, осіб, вакцинованих проти сказу, вагітних і деяких донорів крові обумовлено перехресними реакціями між антитілами, які містяться в хибно-позитивних сироватках (ХПС) і білками ВІЛ, що входять до складу діагностичної тест-системи. Новизна: вперше в Україні проведено комплексне вивчення механізмів виникнення ХПР при серологічній діагностиці ВІЛ-інфекції з розробкою теоретичних, методичних і практичних аспектів роботи. Виділено вуглеводвмісні біополімери з дифтерійного і стафілококового токсинів, культурального середовища після вирощування бактерій: M. tuberculosis, B. subtilis, S. aureus, грибів C. albicans, суспензійних перещеплюваних культур клітин Jurkat і Raji, лейкоцитів крові людини 1 і 2 групи. Ці сполуки названі нами мімікринами за антигенну спорідненість між собою і пептидами ВІЛ, вірусами групи герпесу, гепатиту В і С, краснухи і папіломи. При вивченні біохімічних, фізико-хімічних, імунологічних властивостей мімікринів встановлено, що мімікрини мають глікопротеїнову природу, відрізняються один від одного за складом моноцукрів і амінокислот, однак усі досліджувані препарати мімікринів містять серин, глютамінову кислоту та валін. Теоретично обгрунтовано та доведено зв'язок мімікринів з появою хибно-позитивних реакцій при серологічній діагностиці. Показано наявність в хибно-позитивних сироватках антитіл, що перехресно реагують з білками ВІЛ і мімікринами.Визначено ряд захворювань і станів, при яких в організмі можуть утворюватись перехресно реагуючі антитіла до ВІЛ та встановлена роль мімікринів із бактерій, грибів, токсинів і лімфоїдних клітин в отриманні ХПР при виявленні антитіл до ВІЛ у донорів, осіб вакцинованих проти сказу, вагітних, хворих на цукровий діабет і туберкульоз.Науково обгрунтовані рекомендації щодо вдосконалення імуноферментних тест-систем для діагностики ВІЛ-інфекції шляхом модифікації рекомбінантних білків Gag за рахунок часткового вилучення з них ділянок амінокислотних послідовностей гомологічних з білком з M. tuberculosis.Теоретично обґрунтовано та доведено, що при додаванні анти-мімікринових АТ в розчин для розведення досліджуваних сироваток з метою блокування неспецифічного зв'язування, підвищується специфічність серологічної діагностики ВІЛ-інфекції. Виділені вуглеводвмісні біополімери - мімікрини з бактерій, грибів, токсинів і лімфоїдних клітин антигенне споріднені між собою і пептидами вірусів імунодефіциту людини, герпесу, краснухи, гепатитів В і С та папіломи. Мімікрини різного походження мають глікопротеїнову природу і відрізняються за хімічним складом. Встановлено, що за деякими властивостями мікробні мімікрини схожі до лектинів і білків теплового шоку. Розроблено методику виявлення антитіл проти різних серотипів ВІЛ і створено на основі синтетичних олігопептидів ВІЛ підтверджувальну тест-систему. Підвищена ефективність серологічної діагностики ВІЛ-інфекції за рахунок інгібіції неспецифічних реакцій за допомогою анти-мімікринових антитіл, а також модифікації рекомбінантного білку Gag ВІЛ-1, що має важливе практичне значення. Ступінь впровадження: розроблено методики і проект лабораторного регламенту виділення мімікринів, які необхідні для отримання анти-мімікринових антитіл, що використовуються для блокування неспецифічної взаємодії в імуноферментних тест-системах. Вперше в Україні створено тест-систему для серотипування ВІЛ, яка захищена патентом на корисну модель і розроблено проект лабораторного регламенту на виробництво такої тест-системи. З урахуванням феномену молекулярної мімікрії за нашими рекомендаціями, на НВК "Діапроф-Мед" розроблено генно-інженерну конструкцію і отримано рекомбінантний білок Gag ВІЛ-1, з якого вилучено декілька амінокислотних послідовностей, що є спільними з послідовностями в ділянках білків мікобактерій, завдяки чому збільшено специфічність імуноферментних тест-систем для виявлення антитіл до ВІЛ до 99,7 %. Рекомбінантний білок Gag ВІЛ-1 і тест-системи для визначення антитіл до ВІЛ, в яких використовується цей білок, захищено патентами на винахід і корисну модель. При отриманні хибних результатів при діагностиці ВІЛ-інфекції, доведено доцільність підтвердження наявності або відсутності ВІЛ-інфекції методом імуноблоту і тест-системою для серотипування ВІЛ. Опубліковано: "Практичний посібник з імуноферментного аналізу" і "Серологічна діагностика ВІЛ-інфекції. Практичний посібник", в яких визначено можливі причини ХПР. Сфера впровадження: медицина, ветеринарія, вірусологія Дата реєстрації 2011-11-17 Додано в НРАТ 2020-04-04 Закрити