Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0211U013200, 0110U006124 , Науково-дослідна робота Назва роботи Розробка фундаментальних засад створення імунореагентів нового покоління Назва етапу роботи Керівник роботи Павлова Марина Валеріївна, Дата реєстрації 10-01-2012 Організація виконавець Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Опис етапу Метою роботи було створення нових імунореагентів на основі одержаних нами послідовностей одноланцюгових антитіл (single-chain fragment variable, scFv) та лужної фосфатази Escherichia coli з підвищеною каталітичною активністю (bacterial alkaline phosphatase mutated, BАРmut), а також флуоресцентних білків. Ми планували сконструювати гени химерних білків scFv-BАРmut і ScFv-mCherry та одержати їх бактеріальним синтезом. Химерні білки scFv-BАРmut, ScFv-mCherry синтезовано в E. coli. Встановлено, що результатом амінокислотних замін D330N та D153G у BАР у складі химерного білка є підвищення її каталітичної активності. Показано високу специфічність взаємодії scFv-BАРmut з антигеном, а також можливість використання бактеріальної периплазми та культурального середовища для імунодетекції без попереднього їх очищення. Розроблено схему рефолдингу ScFv-mCherry. Можливість дизайну послідовностей, що кодують scFv заданої специфічності, простота одержання рекомбінантного білка бактеріальним синтезом, висока чутливість виявлення антигену, а також наявність широкого спектру колориметричних, люмінесцентних та флуоресцентних субстратів для фосфатази та яскравість світіння mCherry відкривають нові перспективи використання створених химерних білків для імунохімічного аналізу. Опис продукції Генетичні вектори для експресії в бактеріях химерних білків на основі основі бактеріальної лужної фосфатази з поліпшеною ферментативною активністю та ScFv проти СD34, rhIFN-alfa1b, а також проти rhIFN-beta2b. Продуценти цих химерних білків (E. coli та P. pastoris) Автори роботи Okunev O. V. Pavlova M. V. Shpileva S. P. Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити