Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0213U004840, 0110U005758 , Науково-дослідна робота Назва роботи Катіонні антимікробні пептиди: особливості експресії в клітинах меланоми in vitro та in vivo Назва етапу роботи Керівник роботи Погрібний Петро Висильович, Дата реєстрації 30-12-2013 Організація виконавець Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАНУ Опис етапу В результаті виконання ІУ етапу проекту проведено клонування генів бета-дефенсину-3 людини (hBD-3) та бета-дефенсину-1 людини (hBD-1) в бактеріальних клітинах з використанням GST-системи продукції рекомбінантних білків. Експресовано та очищено рекомбінантний hBD-3 та досліджено його біологічну активність. Встановлено, що hBD-3 володіє антимікробною активністю проти B.subtilis та P.aeruginosa. Встановлено, що на відміну від hBD-2 та hBD-4, рек-hBD-3 в наномолярних концентраціях не впливає на проліферативну активність та життєздатність пухлинних клітин ліній А431, А549 та ТРС-1, не стимулює синтез меланіну в клітинах меланоми людини ліній MelZ та MlIs, та не має істотного впливу на морфологію клітин ліній А431, А549, ТРС-1 та їх рухливість в тесті in vitro. В той же час рек-hBD-3 здатний підсилювати цитотоксичний ефект інших агентів, таких як доцетаксел, рек-hBD-2 та рек-hBD-4, в моделі in vitro. Також встановлено нові дані щодо біологічної активності рек-hBD-4: в концентрації 1-100 нМ рек-hBD-4 стимулює прогресію клітин в точці звірки G2/M, підсилює колоніє-формуючу здатність пухлинних клітин та їх міграційну активність, але при вищих концентраціях (>500 нМ) пригнічує експресію B-Raf, блокує клітинний цикл у точці звірки G1/S, пригнічує міграційну здатність пухлинних клітин та їх здатність до колонієутворення у напіврідкому середовищі. Опис продукції Спосіб полягає у клонуванні послідовності гену hBD-3 у векторі pGEX-2Т та експресії рекомбінантного пептиду в бактеріальних клітинах за допомогою GST-системи для отримання рекомбінантних білків з трьохстадійним очищенням рекомбінантного hBD-3 шляхом афінної хроматографії на глутатіон-сефарозі, розщеплення злитого білка GST-hBD-3 тромбіном та зворотньофазової хроматографії продуктів протеолізу на SepPack C18. Автори роботи Геращенко О.Л. Глушко Н.В. Журавель О.В Солдаткіна М.О. Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити