Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0214U006968, 0113U006053 , Науково-дослідна робота Назва роботи Створення прототипів тест-системи для ДНК-аналізу геномних реорганізацій та епігенетичних порушень, які спричиняють поширені моногенні захворювання центральної та периферійної нервової системи Назва етапу роботи Керівник роботи Лівшиць Людмила Аврамівна, Дата реєстрації 17-04-2014 Організація виконавець Інститут молекулярної біології і генетики НАН України Опис етапу Метою роботи є створення прототипів (лабораторних зразків) тест-систем для ДНК-аналізу геномних реорганізацій (генних мутацій) та епігенетичних порушень геному людини (метилування), які спричиняють найбільш розповсюджені генетично обумовлені захворювання з тяжкою інвалідизацією, пов'язаною із нейродегенерацією центральної нервової системи (синдром ламкої Х-хромосоми, хорея Гентінгтона, синдроми Прадера-Віллі та Ангельмана). На ІІ етапі оптимізовано склад компонентів реакційних сумішей для тест-систем, а також відпрацьовано температурно-часові режими проведення ПЛР та електрофоретичного фракціонування фрагментів для аналізу статусу гіперметилування ламких сайтів Х-хромосоми та аналізу експансії CGG-повторів генівFMR1 та FMR2у індивідів чоловічої статі; точного визначення кількості CGG-повторів гена FMR1 у осіб жіночої статі; визначення диференційного гіперметилування або делецій в хромосомній ділянці 15q11-q13, точного визначення кількості CGG- та ССG-повторів гена ІТ15/HD. Розроблені лабораторні зразки діагностичних наборів (прототипи тест-систем), які були апробовані на зразках ДНК пацієнтів чоловічої статі з клінічними діагнозами синдром ламкої Х-хромосоми(n=20) та несиндромальна Х-зчеплена розумова відсталість (n=40), хорея Гентінгтона(n=20), синдроми Прадера-Віллі та Ангельмана(n=35), а також на зразках ДНК родичів хворих та у вибірці умовно здорових донорів. Відібрано зразки ДНК індивідів з виявленими генетичними порушеннями та нормальними генотипами, в яких визначено нуклеотидну послідовність досліджуваних геномних фрагментів за допомогою секвенування. Ці зразки використані в якості еталонних для генотипування решти аналізованих зразків та верифікації результатів тестування прототипів тест-систем. Створено колекцію еталонних зразків ДНК із точно встановленою кількістю тринуклеотидних повторів в генах FMR1 та IT15, з експансованою кількістю тринуклеотидних повторів в генах FMR1та FMR2, з гіпер- та гіпометилуванням в хромосомних ділянках FRAXA, FRAXE, FRAXF, із порушеннями метилування та/або делеціями алелів материнського та батькового походження, а також ДНК із нормальним патерном метилування батькового та материнського алелів хромосомної ділянки 15q11-q13. Створена колекція налічує 25 контрольних (еталонних) зразків ДНК. Опис продукції На основі розроблених методичних підходів оптимізовано протоколи аналізу та створено лабораторні зразки діагностичних наборів (прототипи тест-систем) для ДНК-діагностики спадкових НДЗ центральної нервової системи: а) для ДНК-діагностики синдрому ламкої Х-хромосоми у індивідів чоловічої статі; б) для ДНК-діагностики кількості CGG-повторів гена FMR1 у осіб жіночої статі; в) для ДНК-діагностики синдромів Прадера-Віллі та Ангельмана; г) для ДНК-діагностики хореї Гентінгтона. За результатами тестування створено колекцію контрольних (еталонних) зразків ДНК з виявленими генетичними та епігенетичними порушеннями в досліджуваних ділянках геному, а також зразків ДНК без даних порушень, яка налічує 25 зразків ДНК. Автори роботи Бичкова Г.М. Грищенко Н.В. Гулковський Р.В. Демидова Г.С. Корпан Я.І. Котенко О.В. Кравченко С.А. Крикливий І.А. Кучеренко А.М. Лівшиць Г.Б. Нечипоренко М.В. Пампуха В.М. Потужня О.О. Чабанова М.В. Чернушин С.Ю. Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити