Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0219U001828, 0118U006259 , Науково-дослідна робота Назва роботи «Створення смарт-сенсорних приладів для аналізу креатиніну та йонів амонію на основі нових нанокомпозитних плівок. Розділ 1. Розробка амперметричного портативного аналізатора, сумісного із сучасними гаджетами, для визначення креатиніну та йонів амонію» Назва етапу роботи Керівник роботи Гончар Михайло Васильович, Кандидат педагогічних наук Дата реєстрації 06-03-2019 Організація виконавець Iнститут біології клітини НАН України Опис етапу Мета етапу 2018 р.: Оптимізація технології виділення, рефолдингу, очищення (His)6-тегованої рекомбінантної креатиніндеімінази (КДІ) з клітин створеного нами надпродуцента та стабілізація фермента. Методи дослідження: мікробіологічні, біохімічні, фізико-хімічні, електрохімічні, ензиматичні. Сконструйовано рекомбінантний штам Escherichia coli, здатний до надпродукції (His)6-тагованої форми фермента із Corynebacterium glutamicum. Рекомбінантний білок виділяли з безклітинного екстракту та тілець включення, а після реактивації білка в присутності 0,3% N-лауроїлсаркозину активний фермент очищали одноетапно, використовуючи металоафінну хроматографію на Ni-NTA агарозі. Питома активність очищеного ферменту - до 20 мкмоль на хвилину та мг білка. Вихід активної КДІ становить, залежно від схеми виділення, 20 та 50 мг з 1 л мікробної культури (із безклітинного екстракту та солюбілізованих тілець включення, відповідно). Вивчено основні фізико-хімічні та кінетичні властивості (His)6-міченого ферменту: молекулярна маса субодиниці, рН- та температурний оптимум, кінетичні параметри відносно креатиніну, стабільність та субстратна специфічність. Показано, що виділена КДІ володіє унікальною термостабільністю - температурний оптимум складає 75 - 80 0С. Стійкість ферменту при зберіганні є теж високою і може бути збільшена за допомогою деяких добавок. За результатами НДР у 2018 р. опубліковано 1 статтю (із сумарним імпакт-фактором 2,70), 3 тез доповідей. Подано до друку 2 статті. Опис продукції Технологія виділення, рефолдингу, очищення (His)6-тегованої рекомбінантної креатиніндеімінази з клітин створеного надпродуцента та стабілізація фермента Автори роботи А.Є. Закальський М.Ф. Іваш О.В. Смуток О.М. Демків О.М. Закальська Т.М. Прокопів Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити