Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0824U002724, Дисертація доктора філософії На здобуття Доктор філософії Дата захисту 16-09-2024 Статус Захищена Назва роботи Експресія генів родини Homeobox у клітинах гліоми за умов гіпоксії та пригнічення IRE1 Здобувач Красницька Дар'я Андріївна, Керівник Мінченко Олександр Григорович Опонент Телегеєв Геннадій Дмитрович Опонент Моргун Богдан Володимирович Рецензент Бабіч Лідія Григорівна Рецензент Векліч Тетяна Олександрівна Опис Дисертація присвячена дослідженню ролі стресу ендоплазматичного ретикулума в регуляції експресії генів, що кодують ключові транскрипційні фактори родини Homeobox. Об’єктом дослідження були молекулярні механізми регуляції експресії генів транскрипційних факторів родини Homeobox та деяких мікроРНК за умов пригнічення IRE1, основного сигнального протеїну стресу ендоплазматичного ретикулума, а також гіпоксії, дефіциту глутаміну і глюкози. Метою роботи було дослідження впливу гіпоксії та дефіциту глутаміну і глюкози на експресію генів транскрипційних факторів родини Homeobox у клітинах гліобластоми U87MG в залежності від функціональної активності IRE1. У ході виконання роботи були використані такі методи біохімії та молекулярної біології як культивування стабільно трансфікованих клітин гліобластоми з пригніченою лише ендорибонуклеазною активністю ERN1 та клітин без обох ензиматичних активностей цього сигнального протеїну, виділення РНК, визначення концентрації та спектральних характеристик отриманих препаратів РНК за допомогою нано-спектрофотометра, синтез комплементарних ДНК шляхом зворотної транскрипції, а також методи кількісної полімеразної ланцюгової реакції у реальному часі для визначення рівня експресії мРНК досліджених транскрипційних факторів і мікроРНК, сайленсінг мРНК,електрофоретичний аналіз нуклеїнових кислот, методи біоінформатики та статистичної обробки результатів. Проведеними дослідженнями були виявлені виражені зміни рівня експресії генів транскрипційних факторів родини Homeobox у культурі клітин гліобластоми лінії U87MG за умов пригнічення IRE1/ERN1, і показано, що зміни в експресії досліджених генів є гено-специфічними і залежать від типу нокдауну ERN1. Було продемонстровано, що пригнічення ендорибонуклеазної та протеїнкіназної активностей сигнального протеїну ERN1 змінює чутливість більшості генів родини Homeobox до гіпоксії, а це свідчить про залежний від ERN1 контроль гіпоксичної регуляції рівня експресії більшості досліджених нами генів цих транскрипційних факторів. Показано, що експресія більшості досліджених генів родини Homeobox є чутливою до дефіциту як глутаміну, так і глюкози, і що пригнічення сигнального шляху стресу ендоплазматичного ретикулума ERN1 переважно модифікує їхні ефекти. Ці результати вказують на ERN1-залежний характер чутливості клітин гліобластоми до забезпечення їх глюкозою та глутаміном. Наукова новизна роботи полягає в тому, що вперше показано, що експресія досліджуваних генів родини Homeobox залежить від протеїну IRE1/ERN1 - основного сигнального шляху стресу ендоплазматичного ретикулуму. Результати продемонстрували важливу роль ендорибонуклеази ERN1 в регуляції експресії генів ZEB2 і TGIF1, а також важливу роль протеїнкінази ERN1 як ключового регулятора експресії генів PBX3, PRRX1, PAX6 і PBXIP1. Принципово нові результати отримано при вивченні гіпоксичної регуляції проонкогенного гена SPAG4 в клітинах гліобластоми, що продемонструвало різке зниження його чутливості до гіпоксії за умов пригнічення ERN1 і свідчить про можливу участь транскрипційного фактора SPAG4 у зниженні інтенсивності проліферації цих клітин за умов нокдауну ERN1. Практичне значення отриманих результатів полягає у виявленні ролі протеїнкіназної активності ERN1 у регуляції експресії генів, пригнічення якої може бути причетним до посиленої інвазивності клітин гліоми шляхом індукції експресії генів PBX3, PRRX1, PAX6 і PBXIP1, а також в ідентифікації мікроРНК, які контролюють експресію мРНК ZEB2 і PAX6 на пост-трансляційному рівні і можуть бути потенційними мішенями для пригнічення проліферації клітин гліобластоми. Дата реєстрації 2024-07-24 Додано в НРАТ 2024-10-09 Закрити