Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0207U005289, 0104U000724 , Науково-дослідна робота Назва роботи Роль SH3-вмісних адаптерних білків Ruk/CIN85/SETA в регулюванні сигнальних мереж нормальних і трансформованих клітин Назва етапу роботи Керівник роботи Дробот Людмила Борисівна, Доктор біологічних наук Дата реєстрації 23-03-2007 Організація виконавець Iнститут біології клітини НАН України Опис етапу 1. Об'єкт: білково-білкові взаємодії, опосередковані адаптерним білком Ruk/CIN85/SETA . Роль ізоформ Ruk/CIN85/SETA в регулюванні апопотозу клітин. Мета: з'ясувати механізми внутрішньо та міжмолекулярних взаємодій, опосередкованих доменами і мотивами ізоформ Ruk. Дослідити зміни профілю експресії та субклітинної локалізації Ruk/CIN85/SETA в процесі апоптичної відповіді клітин. Отримати постійні лінії клітин ембріональної нирки людини лінії НЕК293 та аденокарциноми грудної залози людини з надекспресією повнорозмірної форми адаптерного білка Ruk/CIN85 та вивчити біологічні наслідки її підвищеної експресії. Методи досліджень: експресія рекомбінантних білків в бактерійній системі та в клітинах ссавців, афінна хроматографія білків, методи роботи з культурами клітин, електрофорез білків в ПААГ та нуклеїнових кислот а агарозному гелі, Вестерн-блот аналіз, імунопреципітація, імунофлуорисцентна мікроскопія.Дослідженя з використанням методу зв’язування in vitro GST-кон"югованих фрагментів Ruk продемонстрували, що SH3A і, дещо слабше, SH3B домени Ruk кооперативно взаємодіють з власними пролін-багатими мотивами, в той час як суперспіралізований район забезпечує олігомеризацію ізоформ. SH3C домен не бере участі у внутрішньомолекулярних взаємодіях, але може відігравати регуляторну роль на рівні загальної конформації Ruk. З"ясовано особливочті експресії Ruk/CIN85 в сублініях клітин з різною чутливістю до дії індукторів апоптозу: А549wt (аденокарцинома легені людини), MCF7wt (аденокарцинома грудної залози людини), L1210wt (лімфоцитарна лейкемія миші). Виявлено, що в клітинах лінії С6 в процесі апоптичної смерті, індукованої циклоспорином А, Ruk транслокується до перинуклеарної області, що відповідає ядерній мембрані та ендоплазматичному ретикулуму. Встановлено, що у мітотичних клітинах С6, які перебувають на стадіях метафази і анафази, ендогенний Ruk не лише дифузно локалізований у цитоплазмі, але й у значній кількості концентрується у районі веретена поділу. В результаті проведення комплексу експериментальних робіт отримано постійні лінії клітин НЕК293 та MCF7 з різним рівнем надекспресії повнорозмірної форми адаптерного білка Ruk/CIN85 та вивчено біологічні наслідки її підвищеної експресії. Опис продукції Автори роботи Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити