Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0208U006206, 0107U005244 , Науково-дослідна робота Назва роботи Створення вітчизняного продуцента поверхневого антигену віруса гепатиту В як компонента вакцин на основі метилотрофних дріжджів Назва етапу роботи Керівник роботи Сибірний Андрій Андрійович, Дата реєстрації 23-06-2008 Організація виконавець Iнститут біології клітини НАН України Опис етапу Були сконструйовані вектори, здатні забезпечувати регульований PMOX синтез HВsAg та секреторного попередника інсуліну людини, високу копійність та стабільність інтеграції касет експресії у геном продуцента та високоефективну селекцію найбільш продуктивних штамів в лабораторних умовах. Було отримано продуцент HBsAg EAO2-H25, який містив 4-5 копій тандемно інтегрованого вектора рКО6. Нами було показано, що використання 0,5% Тритону Х 100 у буфері при руйнуванні клітин продуцента покращує екстракцію HbsAg. Регуляція експресії HBsAg різними вуглецевими субстратами у штаму EAO2-H25 була досліджена в умовах періодичної культури. Перевірка складу середовища та ефекту джерела вуглецю на експресію HBsAg виявила, що сахароза та етанол повністю репресують синтез HBsAg у штаму EAO2-H25, а метанол і глюкоза забезпечують порівняно однакові рівні продукції антигену в цього штаму, тоді як ксилоза забезпечує найвищий рівень експресії HBsAg. Ми також показали, що метиламін є найкращим джерелом азоту для продуцентів HBsAg серед інших проаналізованих джерел (таких як аспартат, сечовина), і забезпечує підвищення виходу HBsAg на 30-40% порівняно із іншим традиційним джерелом азоту, сульфатом амонію. Продукція HBsAg у штаму EAO2-H25 в середовищі з ксилозою визначалась в умовах хемостату в ферментері, об'ємом 1л. Попередньо клітини вирощували на багатому середовищі YPS для досягнення високої густини клітин в рідкій культурі, і переносили у середовище з 1% ксилозою і метиламіном для індукції синтезу HBsAg. Нами було показано, що за таких умов частка HBsAg складала приблизно 2,5% від загального клітинного білка. Проте, для ефективної продукції білка у промислових масштабах відсоток HBsAg має складати не менше 7-8. Оскільки склад середовища та метод екстракції вже було оптимізовано, єдиним шляхом підвищення виходу HВsAg залишається збільшення кількості копій касет експресії білка, інтегрованих у геном штама-продуцента. Опис продукції Автори роботи Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити