Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0210U004399, 0107U001637 , Науково-дослідна робота Назва роботи Розробка молекулярно-генетичних тест-систем для детекції резистентних до протитуберкульозних антибіотиків мікобактерій та вивчення неканонічних структур у геномі мікобактерій Назва етапу роботи Керівник роботи Лиманський Олександр Петрович, Дата реєстрації 20-09-2010 Організація виконавець ДУ "Інститут мікробіології та імунології ім. І.І. Мечникова АМН України" Опис етапу Об'єкт дослідження - геномна ДНК мікобактерій туберкульозу, резистентних до ізоніазиду, суперспіральна ДНК pGEMEX, геном мікобактерій туберкульозу та ретровірусів, Т7 РНК-полімераза, комплекси ДНК - РНК-полімераза. Мета роботи - розробка схеми та молекулярно-генетичних тест-систем на основі полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) для детекції мікобактерій туберкульозу, резистентних до протитуберкульозного препарату ізоніазиду, а також встановлення розподілу неканонічних структур (потенційних шпилькових структур та триплексів) у геномі ретровірусів як модельних систем. Методи дослідження - полімеразна ланцюгова реакція, комп'ютерний аналіз, атомно-силова мікроскопія. Розроблено молекулярні технології диференціації мікобактерій туберкульозу дикого та мутантного типів за допомогою стандартної ПЛР. Створено вісім наборів праймерів для молекулярно- генетичної детекції за допомогою мультиплексної ПЛР точкових мутацій та фрагментів katG гена мікобактерій туберкульозу, зчепленого з резистентністю до ізоніазиду, які дозволяють ампліфікувати: 1) повновимірну копію katG гена; 2) п'ять варіантів мутацій в кодоні 315 та одну точкову мутацію в кодоні 463 katG гена. Крім того, створено два набори праймерів для позитивного контролю ампліфікації, один з яких містить кодон 315. Визначено досконалі міжланцюгові триплекси, які потенційно можуть виникати у провірусній ДНК широко розповсюджених ретровірусів великої рогатої худоби (ВРХ) - вірусу лейкозу та вірусу імунодефіциту (геном яких розглядали в якості моделі значно складніше організованого геному бактерій). Визначено інвертовані повтори, які можуть утворювати шпилькові та хрестоподібні структури у геномі вірусів лейкозу та імунодефіциту ВРХ та створено карти локалізації шпильок. Показано, що ретровіруси характеризуються різним кількісним та якісним складом шпилькових структур. Експериментально існування шпильок та триплексів підтверджено за допомогою атомно-силової мікроскопії (АСМ) шляхом візуалізації суперспіральної ДНК pUC8, що несе хрестоподібну структуру, та суперспіральної ДНК pGEMEX. За допомогою АСМ візуалізовано комплекси, що утворює РНК-полімераза (РНКП) бактеріофага Т7 з ДНК-матрицею в процесі транскрипції. На рівні поодиноких молекул отримано зображення стабільних специфічних комплексів, утворених Т7 РНКП з термінальними фрагментами ДНК-матриці. Галузь застосування - мікробіологія, молекулярна біологія, нанотехнологія. Результати НДР рекомендується впровадити в роботу науково-дослідних інститутів НАН України, АМНУ, УААН, а також у системі протитуберкульозних диспансерів МОЗ України. Значущість роботи - розроблені схеми та молекулярно-генетичні набори на основі різних модифікацій полімеразної ланцюгової реакції (ПЛР) дозволяють скоротити визначення лікарської стійкості мікобактерій туберкульозу до протитуберкульозного препарату ізоніазиду з 1-3 місяців традиційними бактеріологічними методами до 1-3 днів за допомогою ПЛР. Опис продукції Створено молекулярну технологію диференціації мікобактерій туберкульозу дикого та мутантного типів. Розроблені молекулярно-генетичні набори з використанням LNA-модифікованих праймерів дозволяють за допомогою алель-специфічної ПЛР диференціювати чутливі та резистентні мікобактерії туберкульозу до протитуберкульозного препарату першого ряду ізоніазиду, а саме постановкою однієї реакції встановити наявність будь-якого з шести можливих варіантів мутацій у кодоні 315 гена katG. Автори роботи Лиманська Ольга Юріївна Лиманський Олександр Петрович Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити