Реєстраційний номер
0211U001705,
0110U007305
, Науково-дослідна робота
Назва роботи
Рекомбінантна аргіназа людини як новий протипухлинний препарат
Назва етапу роботи
Керівник роботи
Стасик Олег Володимирович, Кандидат біологічних наук
Дата реєстрації
26-01-2011
Організація виконавець
Iнститут біології клітини НАН України
Опис етапу
Об'єкт досліджень: продуценти рекомбінантної аргінази людини у дріжджів. Мета досліджень: конструювання векторів та відбір нових дріжджових продуцентів внутрішньоклітинної та секретованої rhARGI та оптимізація регламенту ферментації. Методи досліджень: генно-інженерні, молекулярно-біологічні, генетичні, мікробіологічні, біохімічні. За допомогою методів метаболічної інженерії сконструйовано стабільні штами-надпродуценти рекомбінантної аргінази людини у двох видів дріжджів Saccharomyces cerevisiae та Hansenula polymorpha. Цільовий продукт отримано як His- та/і GST-мічені форми секреторної (злитої з лідерною послідовністю для секреції MFa, яка часто використовується у дріжджовій системі експресії для продукції цільового білка в культуральне середовище) та внутрішньоклітинної форми rhARGI. Для експресії відповідних химерних генів rhARGI у H. polymorpha були використані конститутивний (GAP) та індуцибельний (гену форміатдегідрогенази, FMD) промотори. Між відкритою рамкою зчитування rhARGI та послідовностями для очистки були введені послідовності для протеолітичного розщеплення комерційно-доступним ферментом ентерокіназою для продукції кінцевого продукту, ідентичного нативній hARGI.
Опис продукції
За допомогою методів метаболічної інженерії сконструйовано стабільні штами- надпродуценти рекомбінантної аргінази людини у двох видів дріжджів Saccharomyces cerevisiae та Hansenula polymorpha . Цільовий продукт отримано як His- та/і GST-мічені форми секреторної (злитої з лідерною послідовністю для секреції MFa, яка часто використовується у дріжджовій системі експресії для продукції цільового білка в культуральне середовище) та внутрішньоклітинної форми rhARGI. Для експресії відповідних химерних генів rhARGI у H. polymorpha були використані конститутивний (GAP) та індуцибельний (гену форміатдегідрогенази, FMD) промотори. Між відкритою рамкою зчитування rhARGI та послідовностями для очистки були введені послідовності для протеолітичного розщеплення комерційно доступним ферментом ентерокіназою для продукції кінцевого продукту, ідентичного нативній hARGI.
Автори роботи
Гончар М.В.
Закальський А.Є.
Красовська О.С.
Ржепецький Ю.А.
Додано/оновлено в НРАТ
2020-04-02
