Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0212U001430, 0110U000232 , Науково-дослідна робота Назва роботи Молекулярно-генетичні механізми формування радіаційно-асоційованої онкогематологічної патології у постраждалих внаслідок аварії на Чорнобильській АЕС Назва етапу роботи Керівник роботи Клименко Сергій Вікторович, Доктор медичних наук Дата реєстрації 03-02-2012 Організація виконавець Державна установа "Науковий центр радіаційної медицини Академії медичних наук України" Опис етапу Об'єкт дослідження - клінічні, гематологічні, молекулярно-генетичні, культуральні показники опромінених внаслідок аварії на Чорнобильській АЕС та осіб без радіаційного анамнезу, яким проводилась верифікація мієлодиспластичного синдрому/гострої мієлоїдної лейкемії (МДС/ГМЛ), справжньої поліцитемії (СП), есенціальної тромбоцитемії (ЕТ) та остеомієлофіброзу (ОМФ). Метою роботи було визначення молекулярно-генетичних характеристик онкогематологічних захворювань мієлоїдного походження у хворих на спонтанну та радіаційно-асоційовану патологію. Методи дослідження - клініко-гематологічні, генетичні, культуральні, імунологічні, статистичні. Використовували твердофазний імуноферментний аналізатор Humareader (Німеччина), термоциклер Gene-Amp PCR 2700 (Сінгапур), мікроскопи "Sedival" та "Standard 25" Carl Zeiss, Jena (Німеччина). Обстежено 242 хворих з МДС/ГМЛ, СП, ЕТ, ОМФ. Серед них 125 пацієнтів, які зазнали радіаційного опромінення внаслідок аварії на Чорнобильській АЕС, склали основну групу. Опозитну групу сформували 117 осіб із спонтанною патологією. До групи порівняння увійшли 74 пацієнти з симптоматичним еритроцитозом. Результати досліджень та їх новизна. Попре особливості клінічної картини, радіаційно-асоційовані випадки МПЗ характеризувались ознаками, що знаходились в діапазоні варіабельності діагностичних критеріїв захворювання. Частота мутації V617F гену JAK2, визначена за допомогою мультиплексної полімеразною ланцюговою реакції з алель специфічними праймерами, у хворих на спонтанні та радіаційно-асоційовані СП становила 95,16% та 94,74%, ЕТ - 50% та 50%, ОМФ - 68,18% та 38,46%, МДС/ГМЛ - 0% та 0% відповідно. У хворих на радіаційно-асоційований ОМФ визначається тенденція (р=0,08) до рідшого представлення мутації V617F гену JAK2. Специфічність та чутливість методу визначення мутації JAK2 V617F в якості діагностичного маркеру спонтанної та радіаційно-асоційованої СП становить 100% та 91,67%, 95,35% та 94,73% відповідно, ОМФ - 100% та 100%, 68,18% та 38,5% відповідно. Специфічність та чутливість методу для діагностики ЕТ у хворих на радіаційно-асоційовану та спонтанну ЕТ не відрізнялась і становила 50% та 100% відповідно. Прогностична цінність позитивного та негативного результату тесту мутаційного статусу гену JAK2 свідчить про доцільність його включення до діагностичних алгоритмів верифікації радіаційно-асоційованих СП, ЕТ, ОМФ. Використання тесту на наявність мутації JAK2 V617F для діагностики МДС/ГМЛ радіаційно асоційованої та спонтанної етіології характеризується недостатньою чутливістю, специфічністю, та значущістю для прогнозування позитивності та негативності. За культивування клітин-попередників крові в напівтвердому середовищі на основі метилцелюлози, співвідношення кількості кластерів і колоній у хворих на СП становить 6:1 та 4:1, за МДС - 3:1 та 4:1, за ОМФ - 5:1 та 5:1 у середовищі з аутосироваткою та у середовищі з екзогенним еритропоетином відповідно, що може застосовуватись для діагностики МПЗ у випадках із недостатньою наявністю великих діагностичних критеріїв. Опис продукції Методика визначення мутаційного статусу гену JAK2 V617F із застосуванням мультиплексної полімеразної ланцюгової реакції з алель специфічними праймерами. Для дослідження мутації V617 гену JAK2 використовували клітини периферичної крові із залученням методу алель-специфічної полімеразної ланцюгової реакції (АС-ПЛР). Виділення ДНК здійснювали за стандартним методом з використанням комерційного набору "QIAGEN" . Для дослідження кожної мутації використовували по три праймери (загальний, специфічний для мутантного алеля і специфічний для алеля дикого типу). Ампліфікацію проводили на термоциклері Gene-Amp PCR 2700, Applied Biosystem. ПЛР-суміш складалась з 1,5 ммол/л MgCl2, 0,2 ммол/л dNTPs та 1 од. Taq-полімерази Fermentas (Литва). Алель-специфічні праймери додавались в концентрації 1 мкмол/л для зворотнього праймеру та 0,5 мкмол/л для двох прямих праймерів. 100 нг геномної ДНК ампліфікували протягом 38 циклів. АС-ПЛР складалась з етапу денатурації (15 сек при 94С), анілингу (15 сек при 58С) та елонгації (30 Автори роботи Балан В. В. Дмитренко І.В. Клименко С. В. Костюкевич О.М. Любарець Т.Ф. Міщенюк О.Ю. Прокопенко І.М. Федоренко В.Г. Шолойко В.В. Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити