Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0212U009095, 0112U002802 , Науково-дослідна робота Назва роботи Виявлення генетичних послідовностей, які детермінують якісні характеристики зерна та стійкість до стресових факторів у кукурудзи Назва етапу роботи Керівник роботи Моргун Богдан Володимирович, Дата реєстрації 29-12-2012 Організація виконавець Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України Опис етапу Проведено скрінінг 200 експериментальних форм кукурудзи НВФГ компанії "Маїс" на наявність генетичних послідовностей, які детермінують якісні характеристики зерна (гени wx та fl-2) та стійкість до стресових факторів: стійкість до гербіцидів (гени bar (pat), epsps) і стійкість до комах (cry гени). Проведено виділення загальної ДНК з живої рослинної тканини кукурудзи. Проведено добір та дизайн праймерів для виявлення наявності генів wx, fl-2, bar (pat), epsps, mepsps, CP4 epsps, cryIA(b), cry1F, cry1A.105, mcry3A, cry2Ab2, cry3Bb1, cry34Ab1, cry35Ab1. Розроблено методики мультиплексної та Touchdown полімеразних ланцюгових реакцій для одночасного виявлення декількох генів. Проведено ампліфікацію визначених граничних послідовностей за допомогою ПЛР для підтвердження наявності або відсутності трансгенів (bar, epsps, cry) та генів wx і fl-2. Складено протокол детекції трансгенів та генів wx і fl-2 в експериментальних формах кукурудзи. Складено характеристику експериментальних форм кукурудзи на наявність трансгенів та генів wx і fl-2. Опис продукції 1. Мультиплексна полімеразна ланцюгова реакція (мПЛР) передбачає синтез в одній реакції декількох ділянок ДНК, обмежених двома і більше різними парами праймерів. Методика мПЛР передбачає використання двох (або більше) пар олігонуклеотидних праймерів, специфічних до досліджуваного гену та однієї пари праймерів, специфічної до референтного гену кукурудзи - zein або adh1 (для перевірки якості виділеної загальної ДНК). 2. Методика проведення Touchdown ПЛР (ТД-ПЛР) основана на використанні початкової температури відпалу праймерів на 15 С вище пргнозованої температури плавлення. Протягом послідовних циклів температура відпалу поступово знижується на 1 С до оптимальної для даної пари праймерів. Наступний 21 цикл проходить при оптимальній температурі, забезпечуючи експоненційне збільшення кількості лише цільового амплікону. Автори роботи Банникова Марія Олександрівна Марковський Олексій Вікторович Нітовська Ірина Олександрівна Степаненко Антон Ігорович Федоренко Тетяна Валеріївна Череп Микола Никифорович Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити