Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0213U001024, 0110U000232 , Науково-дослідна робота Назва роботи Молекулярно-генетичні механізми формування радіаційно-асоційованої онкогематологічної патології у постраждалих внаслідок аварії на Чорнобильській АЕС Назва етапу роботи Керівник роботи Клименко Сергій Вікторович, Доктор медичних наук Дата реєстрації 09-01-2013 Організація виконавець Державна установа "Національний науковий центр радіаційної медицини Національної академії медичних наук України" Опис етапу Об'єкт дослідження - клініко-гематологічні, молекулярно-генетичні, культуральні показники опромінених внаслідок аварії на Чорнобильській АЕС та осіб без радіаційного анамнезу, яким проводилась верифікація мієлодиспластичного синдрому, справжньої поліцитемії, есенціальної тромбоцитемії та ідіопатичного мієлофіброзу. Метою роботи було визначити молекулярно-генетичні характеристики радіаційно-асоційованих онкогематологічних захворювань мієлоїдного походження, зокрема мієлодиспластичного синдрому/гострої мієлоїдної лейкемії, хронічних мієлопроліферативних захворювань, відмінних від хронічної мієлоїдної лейкемії (справжньої поліцитемії, есенціальної тромбоцитемії та ідіопатичного мієлофіброзу); обґрунтувати алгоритми скринінгу та діагностики цих патологічних процесів в осіб, які зазнали дії іонізуючого випромінювання внаслідок аварії на ЧАЕС.Методи дослідження - клініко-гематологічні, генетичні, культуральні, імунологічні, статистичні. Використовували твердофазний імуноферментний аналізатор Humareader (Німеччина), термоциклер Gene-Amp PCR 2700 (Сінгапур), мікроскопи "Sedival" та "Standard 25" Carl Zeiss, Jena (Німеччина). Визначено особливості мутаційного статусу гену JAK2 V617F за допомогою мультиплексної полімеразної ланцюгової реакції з алель специфічними праймерами. Валідизовано метод визначення мутації JAK2 V617F в якості діагностичного маркеру за спонтанної та радіаційно-асоційованої патології, зокрема для справжньої поліцитемії (специфічність - 99,14% та 94,73%, чутливість - 95,65% та 96,29% відповідно), ідіопатичного мієлофіброзу (специфічність - 100% для обох груп, чутливість - 61,9% та 33,3% відповідно), есенціальної тромбоцитемії (специфічність - 100% для обох груп, чутливість - 65,62% та 50,0% відповідно). Для Ph-негативних мієлопроліферативних захворювань запропоновано тест на ендогенне колонієутворення у середовищі з аутосивороткою (кластерів ?15,37±2,95) із чутливістю - 100%, специфічністю - 83% для випадків із недостатньою наявністю великих діагностичних критеріїв. Опис продукції Методика визначення мутаційного статусу гену JAK2 V617F із застосуванням мультиплексної полімеразної ланцюгової реакції з алель специфічними праймерами. Для дослідження мутації V617 гену JAK2 використовували клітини периферичної крові із залученням методу алель-специфічної полімеразної ланцюгової реакції (АС-ПЛР). Виділення ДНК здійснювали за стандартним методом з використанням комерційного набору "QIAGEN" . Для дослідження кожної мутації використовували по три праймери (загальний, специфічний для мутантного алеля і специфічний для алеля дикого типу). Ампліфікацію проводили на термоциклері Gene-Amp PCR 2700, Applied Biosystem. ПЛР-суміш складалась з 1,5 ммол/л MgCl2, 0,2 ммол/л dNTPs та 1 од. Taq-полімерази Fermentas (Литва). Алель-специфічні праймери додавались в концентрації 1 мкмол/л для зворотнього праймеру та 0,5 мкмол/л для двох прямих праймерів. 100 нг геномної ДНК ампліфікували протягом 38 циклів. АС-ПЛР складалась з етапу денатурації (15 сек при 94С), анілингу (15 сек при 58С) та елонгації (30 Автори роботи Балан В. В. Дмитренко І.В. Костюкевич О.М. Любарець Т.Ф. Міщенюк О.Ю. Ніколаєнко-Камишова Т.М. Прокопенко І.М. Федоренко В.Г. Шолойко В.В. Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити