Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0213U003135, 0110U006325 , Науково-дослідна робота Назва роботи Дослідження селективної автофагійної деградації органел та цитозольних білків у дріжджів Pichia pastoris та Saccharomyces cerevisiae Назва етапу роботи Керівник роботи Сибірний Андрій Андрійович, Дата реєстрації 24-01-2013 Організація виконавець Iнститут біології клітини НАН України Опис етапу На даному етапі було показано, що FBP P. pastoris і H. polymorpha повністю деградує на середовищі з глюкозою після 5 годин інкубації клітин. Після перенесення клітин із середовища, що містить метанол або етанол на середовище з глюкозою, FBP активність P. pastoris і H. рolymorpha зменшувалася у 4,5 і 2 рази відповідно. Було сконструйовано та проаналізовано штами дріжджів P. pastoris з делецією гена, що кодує FBP1. Для вивчення механізмів катаболічної деградації FBP було сконструйовано плазміду для експресії гібридного гена FBP1 з геном GFP (ген, що кодує зелений флуорисцентний білок) під контролем власного FBP-промотора. Цією плазмідою, було трансформовано штам з делецією fbp1 і отримано колонії, здатні рости на середовищі без додавання гістидину. Отримані трансформанти були проаналізовані шляхом ПЛР, активність FBP у даних трансформантів становила 20% від активності фермента у дикого штаму дріжджів P. pastoris. Встановлено,що делеція генів HXK1, GLK1 і HXK2 та їх комбінація у вигляді подвійних делеційних мутантів дріжджів S. cerevisiae не веде до сповільнення пексофагії. Делеція обидвох гексокіназ (HXK1 і HXK2) або гексокінази 2 в поєднанні із відсутністю глюкокінази 1 (GLK1 і HXK1) призводила до значного сповільнення росту таких штамів на середовищі із олеатом та зменшення рівня тіолази у клітинах таких мутантних штамів. Мутація у регуляторному домені та повна делеція гена HXK2 практично не пошкоджувала біогенез пероксисом. Мутації в гені гексокінази 2 не впливають на дозрівання амінопептидази, тобто не пошкоджують біосинтетичний Cvt-шлях.Пошкодження регуляторного HXK2wrf та каталітичного HXK2wca доменів гексокінази 2 не спричиняють дефектів неспецифічної макроавтофагії. Опис продукції Сконструйовано плазміди та рекомбінантні штами дріжджів S. cerevisiae і P. рastoris, які використовуються для дослідження інактивації та деградації цитозольних ферментів глюконеогенезу і катаболізму метанолу. Автори роботи Назарко Володмир Юрійович Полупанов Андрій Сергійович Сибірний Андрій Андрійович Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити