Реєстраційний номер
0214U005450,
0109U007245
, Науково-дослідна робота
Назва роботи
Вивчення молекулярних основ точності трансляції генетичного коду в процесі утворення аміноацил-тРНК
Назва етапу роботи
Керівник роботи
Тукало Михайло Арсентійович, Доктор біологічних наук
Дата реєстрації
30-12-2014
Організація виконавець
Інститут молекулярної біології і генетики
Опис етапу
Виконані дослідження механізмів редагування помилкових продуктів аміноацилювання лейцил-тРНК синтетазою T.thermophilus, проліл-тРНК синтетазою E. faecalis і D-тирозил -тРНКTyr деацилазою T.thermophilus. Із використанням біохімічних методів, генної інженерії, сайт-спрямованого мутагенезу, модифікації тРНК, комп'ютерного моделювання та квантовохімічних розрахунків показано, що редагувальна активність ЛейРСТТ спрямована проти природних не протеїногенних аналогів лейцину (норваліну і норлейцину). Редагування протеїногенних амінокислот здійснюється переважно у каталітичному домені ЛейРСТТ пре-трансферним шляхом, тобто через гідроліз відповідних аміноацил-аденилатів. Запропоновано тРНК-асистований механізм пост-трансферного редагування для ЛейРС прокаріотів. Вперше, для аміноацил-тРНК синтетеаз 2-го структурного класу, виявлено тРНК-залежне пре-трансферне редагування помилок проліл-тРНК синтетазою E, faecalis, яке опосредковане 2'- і 3'- гідроксильними групами А76 тРНКPro. Показано структурно-функціональну організацію редагувального активного центру ПроРСEF в комплексі з аланіл-тРНКPro і встановлено механізм її каталізу деацилювання . Найважливішим функціональним елементом цього механізму є 2'-OH А76 аланіл-тРНКPro, яка відіграє ключову роль в субстрат-асистованому каталізі. Показано, що D-тирозил-тРНКTyr деацилаза гідролізує помилково утворений D-тирозил-тРНКTyr. Методом молекулярної динаміки вивчено структуру комплексу D-тирозил-тРНКTyr деацилази із T. themophilus з D-тирозил-A76 тРНКTyr та визначено ключові амінокислоти активного центру ферменту для подальшого вивчення механізму деацилювання методом сайт cпрямованого мутагенезу.
Опис продукції
Отримано 9 мутантних форм лейцил-тРНК синтетази Thermus thermophilus. Отримано 11 мутантних форм проліл-тРНК синтетази Enterococcus faecalis
Автори роботи
Бояршин Костянтин Сергійович
Гудзеpа Ольга Йосипівна
Кpикливий Іван Андрійович
Коваленко Оксана Петрівна
Яpемчук Ганна Дмитрівна
Додано/оновлено в НРАТ
2020-04-02
