Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0214U005542, 0113U000860 , Науково-дослідна робота Назва роботи Отримання препаратів рекомбінантного колагену людини з рослинних систем для застосування в офтальмологічній практиці Назва етапу роботи Керівник роботи Кучук Микола Вікторович, Дата реєстрації 27-01-2014 Організація виконавець Інститут клітинної біології та генетичної інженерії НАН України Опис етапу Синтезовано структурні частини генів 1го та 2го ланцюгів колагену людини І типу та ? і ? субодиниць проліл-4-гідроксилази та клоновано їх у вектори для бактеріальної експресії (pQE-30, pQE-60, pET28a). Створено банк препаратів плазмідніх ДНК та відповідних ліній Esherihia coli штамів XL1-Blue, BL21(DE3), C41, C43, Rosetta, які містять дані векторні конструкції. Проведено клонування синтезованих генів у Т-ДНК векторів для агробактеріальної трансформації. Створено банк ліній агробактерії Agrobacterium tumefaciens GV3101, що містять відповідні векторні конструкції з генами колагену та проліл-4-гідроксилази. Шляхом генетичної трансформації методом листових дисків отримано трансгенні рослини Nicotiana benthamiana, що містять гени ? і ? субодиниць проліл-4-гідроксилази. за допомогою молекулярно-біологічних аналізів відібрано лінії, які містять одночасно гени ? і ? субодиниць проліл-4-гідроксилази. Проведено транзієнтну експресію генів ?1 та ?2 ланцюгів колагену в листках стабільно трансформованих рослин N.benthamiana генами ? і ? субодиниць проліл-4-гідроксилази. Оптимізовано протокол вирощування рослин N.benthamiana в умовах кліматичної камери з контрольованими параметрами для проведення одночасної транзієнтної експресії із застосуванням генетичних конструкцій із генами ?1 та ?2 ланцюгів колагену І-ого типу та ? і ? субодиниць проліл-4-гідроксилази. Розроблено протокол для виявлення та оцінки рівнів накопичення рекомбінантних продуктів в екстрактах рослинних білків методом вестерн-блотингу. Розроблено протокол для екстрагування та очищення препаратів рекомбінантного колагену І-типу із застосуванням афінної хроматографії. Отримані зразки очищених препаратів рекомбінантного білку було досліджено на наявність забруднень, кількість, охарактеризовано та передано до Інституту очних хвороб і тканинної терапії ім. В.П. Філатова НАМН України для проведення доклінічних досліджень даних препаратів. Опис продукції Синтезовано структурні частини генів 1го та 2го ланцюгів колагену людини І типу та ? і ? субодиниць проліл-4-гідроксилази та клоновано їх у вектори для бактеріальної експресії. Створено банк препаратів плазмідніх ДНК та відповідних ліній Esherihia coli штамів XL1-Blue, BL21(DE3), C41, C43, Rosetta, які містять дані векторні конструкції. Проведено клонування синтезованих генів у Т-ДНК векторів для агробактеріальної трансформації. Створено банк ліній агробактерії Agrobacterium tumefaciens GV3101, що містять відповідні векторні конструкції з генами колагену та проліл-4-гідроксилази. Шляхом генетичної трансформації методом листових дисків отримано трансгенні рослини Nicotiana benthamiana, що містять гени ? і ? субодиниць проліл-4-гідроксилази, та відібрано лінії, які містять одночасно гени ? і ? субодиниць проліл-4-гідроксилази. Проведено транзієнтну експресію генів ?1 та ?2 ланцюгів колагену в листках стабільно трансформованих рослин N.benthamiana генами ? і ? субодиниць проліл-4-гідроксилази. Оптимізовано Автори роботи Василенко Максим Юрійович Комарницький Ігор Климентійович Котик Богдана Євгенівна Лучаківська Юлія Сергіївна Петерсон Антон Андрійович Щербак Наталія Леонідівна Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити