Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0215U000355, 0113U003164 , Науково-дослідна робота Назва роботи Дослідити ефективність застосування методів антивірусної обробки у технології виділення та очищення білкових факторів плазми крові з використанням афінної хроматографії на макропористих кремнеземних сорбентах Назва етапу роботи Керівник роботи Даниш Тарас Васильович, Дата реєстрації 10-02-2015 Організація виконавець Державна установа "Інститут патології крові та трансфузійної медицини Національної академії медичних наук України" Опис етапу Об'єкти дослідження: фракції плазми крові за Коном, вірусінактивація, тіоціанатний метод, біоспеціфічні кремній-неорганічні сорбенти, фактори згортання та фібринолізу. Мета роботи: визначити основні етапи застосування хімічних методів інактивації вірусів в процесі технологічного одержання білкових препаратів крові з використанням методів попереднього фракціонування та афінної хроматографії на макропористих кремнеземних носіях. Методи: фракціонування, вірусінактивація хімічними агентами, біоспецифічна та гель-проникна хроматографія, центрифугування, ультрадіафільтрація, електрофорез та ін. В результаті виконання роботи одержані наступні науково-практичні результати: вперше в технологію переробки плазми крові на окремі білкові продукти з використанням фракціонування за Коном, сольового та ПЕГ-переосадження, а також хроматографічного очищення на біоспецифічних барвник-кремнеземних макропористих сорбентах, впроваджено тіоціанатний метод інактивації вірусів; застосування для вірусної інактивації в одній технологічній схемі різних за механізмом впливу хімічних агентів (спиртового, ПЕГ-осадження, тіоціанатного, сольвент-детергентного) за рахунок їх синергізму значно збільшує кінцевий антивірусний ефект препаративного одержання білкових препаратів; розроблено простий у використанні фотометричний експрес-метод визначення вмісту тіоціанатів у продуктах переробки плазми, що дозволяє проводити вимірювання концентрації у діапазоні (5-50 х 10-4) моль/л; вивчено та експериментально доведено зворотню негативну дію досліджуваних інактивуючих агентів на активність факторів згортання крові та фібринолізу; досліджено ефект вірусінактивуючих реагентів на сорбційні властивості макропористих кремній-неорганічних сорбентів різної специфічності; обґрунтовано можливість застосування тіоціанатів не тільки для антивірусної обробки, але і для специфічної елюції білкових компонентів з хроматографічних сорбентів; для видалення тіоціанатів з білкових розчинів запропоновано використання методів преципітації, діалізу, ультрадіафільтрації, гель-проникної хроматографії; в експерименті доказано відсутність залишкового вмісту вірусінактивуючих агентів у кінцевих білкових продуктах; створено лабораторний регламент застосування солей тіоціанату у технології одержання факторів згортання крові та фібринолізу. Ступінь впровадження: лабораторний регламент застосування солей тіоціанату у технології одержання факторів згортання крові та фібринолізу, акти впроваджень, доповіді на міжнародних наукових форумах, публікації в науковій літературі. Зареєстровано технологію "Спосіб фракціонування плазми крові". Галузь застосування: центри крові, хіміко-фармацевтичні підприємства, науково-дослідні організації. Ефективність. Одночасне використання різноманітних хімічних методів вірусінаткивації в одній технології значно збільшує сумарну антивірусну безпеку кінцевих білкових продуктів. Застосування макропористих біоспецифічних сорбентів дозволяє одержувати білкові фактори без домішкового вмісту вірусінактивуючих агентів. Опис продукції Плазму крові заморожують, витримують протягом певного часу при мінус 40 оС. Після розморозки кріопреципітат розчиняють, центрифугують для видалення нерозчинних частинок і здійснюють негативну афінну хроматографію на макропористому сорбенті з лігандом-барвником для одержання очищеного фактора згортання крові VIII. Кріосупернатант фракціонують за допомогою сольового переосадження, піддають вірусінактивації сольвент-детергентним та тіоціанатним методами в присутності поліетиленгліколю та проводять хроматографічне розділення факторів протромбінового комплексу, а також білків фібринолітичної системи на біоспецифічних кремній-неорганічних сорбентах з лігандами-барвниками. Автори роботи Вороняк М.І. Даниш Т.В. Деркач С.В. Дульцева Н.А. Дяків Х.І. Мадич С.Є. Орлова Л.В. Рокошевська М.С. Шурко Н.О. Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити