Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0215U008533, 0115U005687 , Науково-дослідна робота Назва роботи Роль білка MRPS18-2 у регуляції клітинного циклу і канцерогенезу Назва етапу роботи Керівник роботи Кашуба Олена Віталіївна, Доктор біологічних наук Дата реєстрації 28-12-2015 Організація виконавець Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАНУ Опис етапу За час виконання проекту ген S18-2 був клонований в GFP- експресуючий вектор. GFP-злитий білок було експресовано в ембріональних фібробластах миші, нокаутних по гену ретинобластоми (RH) у результаті трансфекцій за допомогою ліпофектаміну. Трансфіковані клітини відбирали при рості у середовищі з маркером G418. Було відібрано лінії клітин, які експресували високий рівень білка GFP-S18-2 (RH-18), як показано методом Вестерн-блот аналізу та імунофлуоресцентної мікроскопії у порівнянні до первинної лінії клітин. Також нами було було індуковано GST-злиті S18-2 та RB білки, а також мутантні RB протеїни і чистий GST-білок у бактеріальних культурах (BL21 PLys) за допомогою IPTG. Очищення проводили за домогою носія Sephacryl, покритого глутатіоном. Отримані злиті білки елюювали за допомогою буфера з відновленим глутатіоном (без ДТТ). Якість і кількість білків на носії та елюйованих протеїнів визначали за допомогою вестерн-блот аналізу та голубого Coomassie Опис продукції За допомогою методу були ідентифіковані ключові фактори, які контролюють клітинний цикл при злоякісній трансформації в ембріональних фібробластах миші. Автори роботи Бучинська Любов Георгіївна Гордієнко Інна Михайлівна Кашуба Олена Віталіївна Ковалевська Лариса Миколаївна Чехун Василь Федорович Юрченко Наталія Петрівна Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити