Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0216U000341, 0113U003164 , Науково-дослідна робота Назва роботи Дослідити ефективність застосування методів антивірусної обробки у технології виділення та очищення білкових факторів плазми крові з використанням афінної хроматографії на макропористих кремнеземних сорбентах Назва етапу роботи Керівник роботи Даниш Тарас Васильович, Дата реєстрації 29-01-2016 Організація виконавець Державна установа "Інститут патології крові та трансфузійної медицини Національної академії медичних наук України" Опис етапу Звiт про НДР: 152 с., 12 табл., 15 рис., 6 додатків, 118 джерел літератури. Об'єкти дослідження: фракції плазми крові за Коном, вірусінактивація, тіоціанатний метод, біоспеціфічні кремній-неорганічні сорбенти, фактори згортання та фібринолізу.Мета роботи: визначити основні етапи застосування хімічних методів інактивації вірусів в процесі технологічного одержання білкових препаратів крові з використанням методів попереднього фракціонування та афінної хроматографії на макропористих кремнеземних сорбентах. Методи: фракціонування, вірусінактивація хімічними агентами, біоспецифічна та гель-проникна хроматографія, центрифугування, ультрадіафільтрація, електрофорез та ін. Науково-практичні результати: Вперше впроваджено тіоціанатний метод інактивації вірусів в технологію переробки плазми крові на окремі білкові продукти з використанням фракціонування за Коном, сольового та ПЕГ-переосадження, а також хроматографічного очищення на біоспецифічних барвник-кремнеземних макропористих сорбентах; застосування для вірусної інактивації в одній технологічній схемі різних за механізмом впливу хімічних агентів (спиртового, ПЕГ-осадження, тіоціанатного, сольвент-детергентного) за рахунок їх синергізму значно збільшує кінцевий антивірусний ефект препаративного одержання білкових препаратів; розроблено фотометричний експрес-метод визначення вмісту тіоціанатів у продуктах переробки плазми, що дозволяє проводити вимірювання концентрації у діапазоні (5-50 х 10-4) моль/л; вивчено та експериментально доведено зворотню негативну дію досліджуваних інактивуючих агентів на активність факторів згортання крові та фібринолізу; досліджено ефект вірусінактивуючих реагентів на сорбційні властивості макропористих кремній-неорганічних сорбентів різної специфічності; обґрунтовано можливість застосування тіоціанатів для специфічної елюції білкових компонентів з хроматографічних сорбентів; для видалення тіоціанатів з білкових розчинів запропоновано використання методів преципітації, діалізу, ультрадіафільтрації, гель-проникної хроматографії; в експерименті доказано відсутність залишкового вмісту вірусінактивуючих агентів у кінцевих білкових продуктах; створено лабораторні регламенти: одержання макропористих кремнеземних сорбентів; одержання факторів згортання крові та фібринолізу з використанням макропористих кремнеземних сорбентів; застосування солей тіоціанату у технології одержання факторів згортання крові та фібринолізу. Ступінь впровадження: лабораторний регламент застосування солей тіоціанату у технології одержання факторів згортання крові та фібринолізу, акти впроваджень, доповіді на міжнародних наукових форумах, публікації в науковій літературі. Зареєстровано технології: "Спосіб виділення фактора згортання крові ІХ", "Спосіб фракціонування плазми крові". Галузь застосування: центри крові, хіміко-фармацевтичні підприємства, науково-дослідні організації. Ефективність: одночасне використання різноманітних хімічних методів вірусінаткивації в одній технології значно збільшує сумарну антивірусну безпеку кінцевих білкових продуктів. Застосування макропористих біоспецифічних сорбентів дозволяє одержувати білкові фактори без домішкового вмісту вірусінактивуючих агентів. Опубліковано 35 наукових праць, в тому числі 4 статті, одержано 1 патент на винахід, подано 1 заявку на корисну модель, зареєстровано 2 технології одержання препаратів, підготовлено матеріали до реєстрації технології. Опис продукції Суть нововведення полягає в наступному: досягається підвищення ступеня очищення препарату "Кріопреципітат заморожений" шляхом поєднання етапів попереднього осадження домішкових білків, іонообмінної хроматографії на DEAE-Sepharose та негативної афінної хроматографії на макропористому кремнеземному сорбенті. Поставлена мета досягається поетапним осадженням домішкових білків 3%-ним гідроксидом алюмінію, PEG-4000 та проведенні двох послідовних хроматографічних процесів, а саме іонообмінної (на цьому етапі питома активність фактора зростає приблизно в 20 разів) та негативної афінної (сумарне збільшення питомої активності становить приблизно в 80 раз). Автори роботи Вороняк М.І. Даниш О.Й. Даниш Т.В. Деркач С.В. Дульцева Н.А. Мадич С.Є. Орлова Л.В. Рокошевська М.С. Шурко Н.О. Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити