Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0216U000896, 0115U004200 , Науково-дослідна робота Назва роботи Моделювання в клітинах дріжджів молекулярних процесів, характерних для хвороби Паркінсона, та аналіз впливу екзо- та ендогенних чинників на процеси агрегації та деградації альфа-синуклеїну людини Назва етапу роботи Керівник роботи Стасик Олег Володимирович, Кандидат біологічних наук Дата реєстрації 15-03-2016 Організація виконавець Iнститут біології клітини НАН України Опис етапу Об'єкт дослідження - процеси агрегації та деградації білка альфа-синуклеїну людини в модельних штамах метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha за впливу екзо- та ендогенних факторів. Мета етапу дослідження - конструювання модельних штамів для дослідження молекулярних механізмів утворення та деградації альфа-синуклеїнових агрегатів, використовуючи клітини метилотрофних дріжджів H. polymorpha. У результаті проведеної роботи було сконструювано вектор для експресії химерної відкритої рамки зчитування yEGFP3-SNCA та отримано штами метилотрофних дріжджів H. polymorpha, у яких продукується альфа-синуклеїн людини, мічений зеленим флуоресцентним білком (EGFP). Присутність в геномі рекомбінантних штамів відкритої рамки зчитування гена SNCA, який кодує альфа-синуклеїн людини, було підтверджено за допомогою Саузерн блот-аналізу та полімеразної ланцюгової реакції в реальному часі. Наявність гетерологічного білка альфа-синуклеїну, міченого EGFP, у клітинах модельних штамів було детектовано методом флуоресцентної мікроскопії та Вестерн блот-аналізу. Для моделювання старіючих нейронів за хвороби Паркінсона, яким притаманний гіпометаболізм глюкози, нами було сконструйовано штами, що продукують альфа-синуклеїн людини та характеризуються пошкодженим транспортом глюкози. Для дослідження ролі інтенсивності метаболізму глюкози у цитотоксичних впливах гетерологічного білка альфа-синуклеїну на клітини модельних штамів нами також було сконструйовано штам із конститутивною експресією гена низькоафінного транспортера глюкози HXT1 та гена SNCA, який кодує альфа-синуклеїн людини. У ході роботи нами було встановлено, що продукування та накопичення альфа-синуклеїну людини в клітинах метилотрофних дріжджів H. polymorpha призводить до пошкодження росту та негативно впливає на життєздатність клітин. Виявлено, що практично всі отримані нами модельні штами не формували видимих амілоїдів альфа-синуклеїну. Мутантному штаму gcr1-2-SNCA, який має пошкоджену катаболітну репресію та транспорт глюкози, була притаманна посилена агрегація флуоресцентно міченого альфа-синуклеїну. Така відмінність у здатності утворювати агрегати не була результатом пошкодження метаболізму глюкози, оскільки також спостерігалась і у разі вирощування клітин на середовищі з гліцеролом. Молекулярний механізм цього цікавого ефекту досліджується. Ключові слова: альфа-синуклеїн людини, метилотрофні дріжджі, хвороба Паркінсона Опис продукції Створено новий модельний організм на основі дріжджів Hansenula polymorpha, в яких продукується альфа-синуклеїн людини, для пошуку ефективних підходів до терапії хвороби Паркінсона шляхом індукції селективної або загальної автофагійної деградації цього білка за умов дефіциту незамінних або напівзамінних для людини амінокислот на тлі впливу різних ендо- та езогенних чинників (іони металів, надлишок або дефіцит внутрішньоклітинної глюкози та ін.). Автори роботи Бобак Ярослав Петрович Денега Ірина Олегівна Переверзєва Галина Георгіївна Стасик Олег Володимирович Стасик Олена Георгіївна Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити