Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0216U002463, 0111U002630 , Науково-дослідна робота Назва роботи Механізми регуляції автофагії, відповіді на стрес та синтезу біологічно-активних сполук у дріжджів. Назва етапу роботи Керівник роботи Сибірний Андрій Андрійович, Дата реєстрації 17-03-2016 Організація виконавець Інститут біології клітини НАН України Опис етапу Ідентифіковано потенційні білки-партнери білка Atg28, задіяного в більшості автофагійних шляхів у дріжджів Pichia pastoris, зокрема, білок Atg17, що регулює активність Atg1 та необхідний для утворення повнорозмірних автофагосом, та новий білок Atg35, задіяний в утворенні специфічних МІРА-структур при мікропексофагії. Ідентифіковано нові гени MON1, CCZ1 і YPT7 метилотрофних дріжджів P. pastoris, що задіяні у пексофагії, шляху транспорту гідролаз із цитозолю до вакуолі (Сvt-шлях) та неспецифічній макроавтофагії. Ідентифіковано також ген GSS1 цього виду дріжджів, що кодує сенсор глюкози. Його делеція також веже до пошкодження пексофагії. Вивчено механізми відповіді на стрес, що спричиняється спиртами у метилотрофних дріжджів Hansenula polymorpha. Ідентифіковано новий ген ЕТТ1, делеція якого призводить до надчутливості до етанолу, а надекспресія, навпаки, до резистентності до етанолу та підвищених температур. Надекспресія гену FPS1 викликала підвищену стійкість цього виду дріжджів до етанолу та вищих спиртів, зокрема, ізобутанолу. Селекціоновано мутанти H. polymorpha зі зниженим та підвищеним вмістом трипептиду глютатіону в клітинах, які можуть бути використані для подальшої селекції надсинтетиків цього трипептиду. Сконструйовано штами з підвищеним синтезом етанолу з пентози ксилози, що було досягнуто шляхом надекспресії генів перших трьох початкових реакцій катаболізму ксилози XYl1m, XYL2 та XYL3, а також делецією або пошкодженнями внаслідок інсерції в ген, залучений в ініціацію автофагії ATG13. З метою дослідження можливості продукування водню бактеріями як модель використано рекомбінантні клони штаму хемолітотрофної бактерії Shewanella oneidensis з делетованими генами власних гідрогеназ hydA та hyaB, що продукують мічену гідрогеназу Pseudotrichonympha grassii. Виявлено, що надсинтез рибофлавіну у дріжджів Candida famata можна підвищити шляхом модифікації та наступної надекспресії генів PRS3 і ADE4 (кодують фосфорибозил пірофосфат синтетазу і фосфорибозил пірофосфат амідотрансферазу, відповідно), які залучені в біосинтез ГТФ de novo. Встановлено, що зростання надсинтезу рибофлавіну може бути досягнуте також шляхом надекспресії ідентифікованого нами раніше гена SEF1, який коддує активатор транскрипції. За допомогою методу qRT-PCR показано, що у C. famata і P. stipitis SEF1 регулюється за умов дефіциту Феруму в середовищі. Ідентифіковано потенційні сайти зв'язування для білка Sef1 у промоторі гену RIB1 з використанням дріжджової одногібридної системи. Вперше сконструйовано рекомбінантні штами C. famata, здатні до надсинтезу флавінового нуклеотиду ФАД, здатні продукувати цей нуклеотид без додавання дорогих екзогенних попередників. Цього було досягнуто шляхом надекспресії гену FAD1, що кодує ФАД синтетазу, у попередньо сконструйованого штаму, що здатен до надсинтезу іншого флавінового нуклеотиду ФМН. Опис продукції Ідентифіковано нові гени MON1, CCZ1 і YPT7 метилотрофних дріжджів P. pastoris, що задіяні у пексофагії і білки-партнери білка Atg28. Ідентифіковано новий ген ЕТТ1, що забезпечує стійкість до етанолу та вищих спиртів. Селекціоновано мутанти H. polymorpha зі зниженим та підвищеним вмістом трипептиду глютатіону. Сконструйовано штами з підвищеним рівнем утворення етанолу з ксилози. Ідентифіковано нові гени, що беруть участь у захисті від метаболічного та оксидативного стресу. Встановлено, що зростання надсинтезу рибофлавіну може бути досягнуте шляхом надекспресії гена транскрипційного фактора SEF1, а також генів залучених в біосинтез ГТФ de novo. Ідентифіковано потенційні сайти зв'язування для білка Sef1 у промоторі гену RIB1.Сконструйовано рекомбінантні штами C. famata, здатні до надсинтезу флавінового нуклеотиду -ФАД. Автори роботи Борецький Ю.Р. Булботка Н. Гринів О.Б. Дмитрук К.В. Дмитрук О.В. Куриленко О.О. Кшановська Б.В. Левків К.О. Лизак О.О. Лужецький Т.Б. Муращенко Л.Р. Пиняга Ю.В. Рачкевич Н.О. Семків М.В. Фаюра Л.Р. Федоренко В.О. Федорович Д.В. Юрків М. Яковенко Г.Й. Яцишин В.Ю. Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити