Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0216U005007, 0115U006687 , Науково-дослідна робота Назва роботи Отримання стабільних ліній пухлинних клітин, що експресують фенотипові та молекулярні ознаки ракових стовбурових клітин (CSCs), для розробки та моніторингу ефективності протипухлинних препаратів нового покоління Назва етапу роботи Керівник роботи Дробот Людмила Борисівна, Дата реєстрації 11-01-2016 Організація виконавець Інститут біохімії ім. О.В. Палладіна НАНУ Опис етапу Основною метою проекту було отримати стабільні лінії пухлинних клітин грудної залози, легені й ободової кишки з підвищеною і/або зниженою експресією адаптерного протеїну Ruk/CIN85, з'ясувати роль досліджуваного сигнального протеїну у розвитку таких функціональних та молекулярних ознак пухлинних стовбурових клітин (CSCs) як здатність формувати мамосфери у детермінованому середовищі на низькоадгезивному пластику, експресія окремих поверхневих маркерів, хіміорезистентність, підвищення вмісту та активності мембранних АВС транспортерів, активності альдегіддегідрогенази (АLDH), здатність до посиленої міграції й інвазії, продемонструвати придатність отриманих субліній клітин для пошуку і підбору фармакологічних препаратів, скерованих на пригнічення фенотипу CSCs. У роботі були використані такі методи дослідження: методи роботи з культурами клітин, культивування сфероїдів, протокова цитофлуориметрія, МТТ тест, електрофорез протеїнів у ПААГ, Вестерн-блот аналіз, флуориметричне визначення активності ALDH, аналіз міграції й інвазії пухлинних клітин in vitro з використанням модифікованої камери Бойдена, полімеразна ланцюгова реакція у реальному часі (qPCR), мишача модель канцерогенезу in vivo, морфологічний аналіз зразків пухлин . Вперше показано, що стабільна надекспресія повнорозмірної форми адаптерного протеїну Ruk/CIN85 у клітинах аденокарциноми грудної залози людини лінії MCF-7 та клітинах аденокарциноми легені людини лінії А549 супроводжується розвитком функціональних і молекулярних ознак, характерних для пухлинних стовбурових клітин і пов'язаних з їх посиленою здатністю до міграції, інвазії і метастазування, резистентністю до дії хіміотерапевтичних препаратів. Для оцінки вкладу адаптерного протеїну Ruk/CIN85 до контролю інвазії й метастазування пухлинних клітин на моделі in vivo було використано стабільні сублінії (В1 та В3) клітин перевивної карциноми легені Льюїс миші LLC зі зниженим за допомогою siRNA-інтерференції рівнем експресії Ruk/CIN85. Встановлено, що зниження рівня Ruk/CIN85 в клітинах LLC призводить до близько 33% пригнічення швидкості росту пухлин після короткого латентного періоду, зменшення об'єму й індексу маси первинних пухлин та суттєвого зменшення (на 80-85%) кількості та розмірів метастазів in vivo. Результати проведених досліджень свідчать про залучення адаптерного протеїну Ruk/CIN85 до розвитку функціональних і молекулярних ознак ракових стовбурових клітин (CSCs), важливих для прогресії пухлин in vivo. Отримані сублінії аденокарциномних клітин грудної залози та легені можуть бути використані для широкомасштабного скринування фармпрепаратів, скерованих на знищення популяції CSCs. Опис продукції Клітини аденокарциноми грудної залози людини лінії MCF-7 з надекспрессією адаптерного протеїну Ruk/CIN85 та клітини карциноми легені миші з пригніченою експресією цьогго протеїну. Отримані результати свідчать про потенційну роль протеїну Ruk/CIN85 в розвитку і підтриманні фенотипу клітин, подібного до стовбурових пухлинних клітин. Створені моделі можуть бути використані для ідентифікації і характеристики нових молекулярних компонентів сигнальних мереж, залучених до контролю критичних сторін функціональної активності стовбурових пухлинних клітин в канцерогенезі. Автори роботи Комісаренко С.В. Пасічник Ганна Володимирівна Петухов Дмитро Миколайович Шандренко С.Г. Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити