Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0217U002344, 0115U004200 , Науково-дослідна робота Назва роботи Моделювання в клітинах дріжджів молекулярних процесів, характерних для хвороби паркінсона, та аналіз впливу екзо- та ендогенних чинників на процеси агрегації та деградації альфа-синуклеїну людини Назва етапу роботи Керівник роботи Стасик Олег Володимирович, Кандидат біологічних наук Дата реєстрації 06-02-2017 Організація виконавець Iнститут біології клітини НАН України Опис етапу Для моделювання процесів, притаманних нейронам за хвороби Паркінсона, було сконструйовано вектор pGLG61-SNCA для експресії у клітинах дріжджів Hansenula рolymorpha химерного конструкту SNCA-GFP, який складався з послідовності гена людського альфа-синуклеїну (SNCA), злитого з геном зеленого флуоресцентного білка (yEGFP). Оскільки патологія дофамінергічних нейронів чорної субстанції середнього мозку у разі хвороби Паркінсона часто розвивається на тлі надсинтезу альфа-синуклеїну, в роботі використовували штами - мультикопійні інтегранти, відібрані за стійкістю до генетицину, що характеризувалися підвищеною флуоресценцією міченого GFP альфа-синуклеїну в цитозолі. Встановлено, що у середовищі з 1 % глюкози (фізіологічні умови культивування дріжджів) частка мертвих клітин штаму NCYC 495 / SNCA була помітно вищою порівняно зі штамом дикого типу, що свідчить про токсичний ефект гетерологічної експресії гена альфа-синуклеїну. Отримані результати були підтверджені кінетиками росту досліджуваних штамів у рідкій культурі. Для моделювання умов гіпоглікемії у клітинах H. рolymorpha використовували середовище із 0,1 % глюкози. Встановлено, що кількість клітин штаму NCYC 495 / SNCA, в яких детектувався флуоресцентно-мічений альфа-синуклеїн, у перші 18 год культивування швидше зменшувалася на середовищі з низькою концентрацією глюкози (0,1 %) порівняно з клітинами, вирощеними на середовищі з високою концентрацією глюкози (1 %), що супроводжувалося прогресивною загибеллю клітин. Досліджено, що надлишок глюкози в культуральному середовищі підвищуює резистентність модельних штамів до продукції гетерологічного альфа-синуклеїну. З'ясовано, що токсичність альфа-синуклеїну для клітин модельних штамів дріжджів послаблюється іонами Mn2+; подібним чином токсичний ефект іонів Mn2+ у середовищі послаблюється під дією гетерологічно продукованого альфа-синуклеїну у разі вирощування клітин на середовищі з низьким вмістом глюкози (0,1 %). Отримані дані свідчать про ефективність вибраної моделі для дослідження впливу різних екзогенних чинників і цитотоксичніть альфа-синуклеїну людини. Опис продукції Створено нову модель гіпоглікемічного та гіперглікемічного стану нейронів у разі хвороби Паркінсона (ХП) на основі термотолерантних дріжджів Hansenula polymorpha, в яких продукується альфа-синуклеїн людини. Ця модель є зрувчною для пошуку ефективних підходів до терапії ХП шляхом індукції селективної або загальної автофагійної деградації цього білка за умов дефіциту чи надлишку позаклітинної глюкози. Автори роботи Бобак Ярослав Петрович Стасик Олег Володимирович Стасик Олена Георгіївна Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити