Реєстраційний номер
0217U003484,
0116U004130
, Науково-дослідна робота
Назва роботи
Визначити особливості структури популяції збудника туляремії, що циркулює в Україні, на основі молекулярно-генетичного та еколого-епідеміологічного моніторингу та її значення в епідпроцесі інфекції
Назва етапу роботи
Керівник роботи
Нехороших Зоя Миколаївна,
Дата реєстрації
25-04-2017
Організація виконавець
Державна установа "Український науково-дослідний протичумний інститут ім. І.В.Мечнікова"
Опис етапу
Звіт про НДР: 112 сторінок, 18 таблиця, 41 малюнок, 94 джерела. Мета наукових досліджень - провести порівняльне молекулярне генотипування штамів F.tularensis, ізольованих з різних джерел в природних осередках туляремії на території України, вивчити в порівняльному аспекті in vitro і in vivo їх окремі фенотипічні властивості, визначити епідеміологічні особливості захворюваності людей на туляремію. Методи: бактеріологічні, біологічні, культурні, цитоморфологічні, молекулярно-біологічні, імунологічні, еколого-епідеміологічні, клінічні, статистичні. На основі використання мультилокусного VNTR-аналізу проведено молекулярно-генетичне типування 199 штамів F. tularensis holarctica, ізольованих в різних ландшафтно-географічних зонах (Полісся, Лісостеп, Степ), встановлено їх генотипічну різноманітність, ідентифіковано 44 генотипи різних груп А, В, С і показана їх певна територіальна приуроченість. Генотипування штамів F.tularensis проводили на основі визначення кратності повторів 4-х VNTR-локусів з порівняльною характеристикою частоти зустрічаємості алелів поліморфних VNTR-локусів FT-M3, FT-M6, FT-M19, FT-M20. Проведено також генотипування 9 природних ізолятів, виділених в Одеській області від кліщів в 2015-2016 рр., встановлено їх ідентичний алельних профіль за 4-ма вивченими VNTR-локусами, в результаті чого всі вони віднесені до генотипу В111, але до двох штамів: № 108 (2015 р.) і №60 (2016 р.). У порівняльному аспекті in vitro на моделі клітин периферійної крові людини (ПКЛ) та in vivo на біомоделі білих мишей проведено вивчення вірулентних властивостей 38 штамів F. tularensis різних груп генотипів (А, В, С) і вакцинного штаму F. tularensis 15 Гайського. Встановлено, що під дією природних ізолятів in vitro найбільш виражені деструктивні зміни спостерігали у макрофагів, які є клітинами-мішенями для штамів генотипу А, і нейтрофііви - клітин-мішеней для вакцинного штаму і штамів груп генотипів В і С. Проведені нами дослідження дозволили вперше встановити, що при розвитку експериментальної туляремійної інфекції in vitro збудник туляремії здатний адсорбуватися на тромбоцитах, активувати їх і стимулювати взаємодію F. tularensis з різними клітинами ПКЛ, що посилювало їх цитодеструкцію. Встановлено кореляцію результатів порівняльного вивчення вірулентності штамів F.tularensis з використанням двох експериментальних моделей in vitro і in vivo. Визначено, що найбільш ранні і важкі цитодеструктивні пошкодження клітин ПКЛ і паренхіматозних органів білих мишей зумовили штами F.tularensis генотипів групи А, ізольовані з різних джерел, в тому числі від людей на фоні епідускладнень, що свідчило про їх високу вірулентність. Результати експериментальних досліджень, проведених in vitro в системі клітин ПКЛ по визначенню вірулентності штамів F.tularensis, можуть бути одним з критеріїв оцінки активності природних осередків туляремії і прогнозування можливих епідускладнень. Проведені дослідження дозволили вивчити основні біологічні властивості регіональних штамів F. tularensis, визначити особливості їх генотипічних і фенотипічних характеристик, а також значення в епідпроцесі туляремійної інфекції. Ретроспективний аналіз захворюваності на туляремію в Україні виявив недостатній рівень своєчасної та достовірної діагностики туляремійної інфекції. Вакцинація, ревакцинація проти туляремії "груп епідризику" на ензоотичних територіях не проводиться, що є загрозливим фактором при даній інфекції. Представлений аналіз захворюваності може служити основою для подальшого більш детального планування молекулярно-генетичного і еколого-епідеміологічного обстеження природних осередків туляремії з метою проведення своєчасних профілактичних і протиепідемічних заходів.
Опис продукції
Проведено апробацію та отрмиання 3 експериментальних серій авторської ПЛР тест-системи, сконструйованої з використанням діагностично -значущих фрагментів ДНК F.tularensis: гену lpnA. Складена аналітична нормативна документація (Технічні умови).
Автори роботи
Видайко Н.Б.
Галаев А. В.
Джуртубаева Г. Н.
Егорова Е. А.
Загоруйко М.А.
Ковбасюк Е. В.
Маньковская Н. Н.
Нехороших З. Н.
Новохатній Ю.А.
Пилипенко Н. В.
Процышина Н. М.
Сахно Е. И.
Додано/оновлено в НРАТ
2020-04-02
