Реєстраційний номер
0217U004788,
0116U002409
, Науково-дослідна робота
Назва роботи
Розробити та обгрунтувати доцільність застосування сучасних нано- та клітинних технологій для підвищення протипухлинної та імуномодуляторної властивостей вакцин на основі дендритних клітин
Назва етапу роботи
Керівник роботи
Храновська Наталя Миколаївна,
Дата реєстрації
03-03-2017
Організація виконавець
Національний інститут раку
Опис етапу
Об'єкт дослідження - фенотипові та функціональні характеристики дендритних клітин (ДК) хворих на злоякісні новоутворення та практично здорових людей, технології конструювання протипухлинних вакцин на основі ДК, рівень експресії мРНК цитокінів. Мета роботи - розробити ефективну технологію отримання Тх-1 - поляризуючих ДК моноцитарного походження із використанням різних біоактивних медіаторів. Методи дослідження - метод культури клітин, цитофлюориметричні, імунологічні, молекулярно-генетичні, статистичні. Апаратура - проточний цитофлюориметр FACSCalibur, центрифуги ОПН-3, мікроскоп, ваги WPS 600/C та ВТ, ампліфікатор Veriti 96 Well Thermal Cycler, флуоресцентний мікроскоп Imager.M1 "Axio Zeizz", Німеччина, спектрофотометр Nano Drop 1000, 7500 Real-Time PCR Systems. Встановлено, що ДК, генеровані з моноцитів хворих на злоякісні новоутворення за фенотиповими та цитоморфологічними властивостями відносяться до клітин середнього ступеня зрілості, експресують високий рівень Bcl-2 та мРНК CCR7 на рівні ДК, одержаних у практично здорових людей. Встановлено, що рівень експресії мРНК імуносупресивних цитокінів TGF-b, IL-10 та ферменту IDO в ДК, генерованих у хворих на злоякісні новоутворення, є підвищеним у порівнянні із ДК практично здорових людей (р>0.05), а рівень продукції біоактивного IL-12 дещо знижений. Доведено, що поєднання двох активуючих сигналів - IFN-a та LPS значно не вплинуло на фенотипові характеристики ДК у порівняні з активацією тільки за допомогою LPS. Встановлено, що комбінації LPS+ IFN-a сприяє Тх1 - поляризації генерованих ДК, не індукуючи при цьому їхні толерогенні властивості. При використанні IFN-a (10 тис. МО/мл) спостерігалось збільшення рівня експресії мРНК TNF-a (р>0.05) та незначне зменшення рівня експресіїї мРНК IL-10; спостерігалось посилення експресії мРНК хемокинів RANTES та МІР 1-a в 2-7 разів (р>0,05). Встановлено, що екстракт цитоплазматичних мембран (ЕЦМ) Staphylococcus aureus Wood 46 у найменшій із досліджуваних концентрацій (0,2 мкг/мл) сприяє достовірному посиленню експресії молекул CD86 та HLA-DR на генерованих ДК. ЕЦМ Staphylococcus aureus Wood 46 суттєво впливає на фагоцитарну активність генерованих ДК, та при цьому має дозозалежний ефект: при збільшенні концентрації ЕЦМ спостерігається зменшення фагоцитарної активності ДК. Доведено, що комбінація IFN-a (10 тис. МО/мл) та ЕЦМ Staphylococcus aureus Wood 46 сприяє підвищенню рівнів експресії мРНК Тх1-поляризуючих цитокінів ІFN-a та TNF-a в генерованих ДК, (р>0.05), а також призводить до значного збільшення рівня експресії хемокіну CCR7, (р>0.05), що свідчить про зростання міграційної активності ДК та здатність ініціювати імунну відповідь. Отримані нами результати обґрунтовують можливість і перспективність використання комбінації чинників IFN-a і LPS та IFN-a і ЕЦМ Staphylococcus aureus Wood 46 для оптимізації методів отримання зрілих ДК, придатних для застосування в якості клітинної основи при створенні індивідуальних лікувальних протипухлинних вакцин.
Опис продукції
Отримані результати обґрунтовують можливість і перспективність використання комбінації чинників IFN-а і LPS та IFN-а і екстракт цитоплазматичних мембран Staphylococcus aureus Wood 46для оптимізації методів отримання зрілих дендритних клітин, придатних для застосування в якості клітинної основи при створенні індивідуальних лікувальних протипухлинних вакцин
Автори роботи
Іномістова М.В.
Сидор Р.І.
Скачкова О.В.
Храновська Н.М.
Додано/оновлено в НРАТ
2020-04-02
