Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0217U004841, 0116U002208 , Науково-дослідна робота Назва роботи Створення нових біосенсорних та ензиматичних методів визначення вмісту креатиніну як біомаркера функціонального стану нирок та контролю процесу гемодіалізу. Назва етапу роботи Керівник роботи Гончар Михайло Васильович, Кандидат педагогічних наук Дата реєстрації 09-03-2017 Організація виконавець Iнститут біології клітини НАН України Опис етапу Опрацьовано високочутливий експрес-метод оцінки активності креатиніндеімінази (КДІ ) з флуориметричною детекцією кінцевого продукту та проаналізовано колекцію плісеневих грибів (10 видів) на наявність КДІ. Показано, що найвищу активність КДІ у середовищі з креатиніном виявляють штами грибів Botrytis allii та Chaetomium globosum. Проведено клонування гена codA Corynebacterium glutamicum на векторах індуктивних систем експресії з включенням у структуру рекомбінантного білка (His)6-фрагмента. Сконструйовано рекомбінантний надпродуцент КДІ на основі клітин E. coli з продуктивністю 20-50 мг/л культури. Опрацьовано одноетапний метод очищення рекомбінантного фермента з використанням метало-афінної хроматографії та отримано високо очищений препарат фермента з питомою активністю 22 мкмоль·хв-1·мг-1білка. Проведено фізико-хімічну та ензимологічну характеристику фермента, зокрема, визначено молекулярну масу субодиниці (46,3 кДа), вивчено температурний та рН-профіль активності, досліджено термо- та рН-стабільність фермента та його кінетичні параметри (k(кат) = 7,15 с-1; K(M) = 1,96 мМ відносно креатиніну). Показано, що фермент є термостабільним, має високий температурний оптимум (75 °С) і стійкий у широкому діапазоні рН (6,0-10,5). Опис продукції Біоаналітичні методи на основі рекомбінантних ферментів Автори роботи Іваш М.Ф. Гайда Г.З. Демків О.М. Закальська О.М. Закальський А.Є. Куцяба В.І. Лаврик М.І. Прокопів Т.М. Синенька М.М. Смуток О.В. Стасюк Н.Є. Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити