Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0218U000574, 0116U000177 , Науково-дослідна робота Назва роботи Одержати нові біоспецифічні сорбенти на основі кремній-неорганічних матриць та дослідити їх основні властивості та ефективність застосування у технологіях фракціонування плазми крові Назва етапу роботи Керівник роботи Даниш Тарас Васильович, Дата реєстрації 02-02-2018 Організація виконавець Державна установа "Інститут патології крові та трансфузійної медицини Національної академії медичних наук України" Опис етапу Звiт про НДР: 103 с., 1 табл., 11 рис., 3 додатки, 70 джерел літератури. Об'єкти дослідження: фракції плазми крові ІІ+ІІІ та ІІІ за Коном, фактори протромбінового комплексу, фактор VIII зсідання крові, плазміноген, альбумін, імуноглобулін G, гідрофобні кремнеземні сорбенти. Мета роботи: синтезувати нові сорбенти на основі макропористих кремній-неорганічних матриць та гідрофобних лігандів, придатні для застосування в процесі технологічного одержання білкових препаратів плазми крові з використанням методів попереднього фракціонування, афінної хроматографії та антивірусної обробки. Методи: хімічні методи синтезу, хроматографічні методи виділення та очищення протеїназ, методи попереднього фракціонування плазми крові, центрифугування, афінна та іоно-обмінна хроматографії, гель-фільтрація, діаліз, спектрофотометрія, методи визначення активності протеїназ, імуноферментні, електрофоретичні методи дослідження, вірусінактивація. В результаті виконання роботи одержані наступні науково-практичні результати: апробовано в експерименті низку похідних аміно- та гідроксипропіл-Діасорбів з гідрофобними лігандами (ізопропіл, бутил, октил, феніл) та доведено їх придатність для очищення фактора зсідання VIII, факторів протромбінового комплексу (II, VII, IX, X) та фібринолізу (плазміноген, плазмін), видалення вірусінактивуючих агентів; досліджено оптимальні умови використання синтезованих гідрофобних сорбентів (рН, іонна сила сорбції та десорбції, присутність полярних чи неполярних розчинників, хелаторів і т. д.) для ефективного розділення досліджуваних білків; експериментально доведено ефективність поєднання гідрофобної та афінної хроматографій на кремнеземних сорбентах для видалення антивірусних агентів з розчинів білкових препаратів в процесі їх технологічного одержання; обґрунтовано місця застосування етапів гідрофобної хроматографії у технології фракціонування плазми крові: після висолювання високими концентраціями амонію сульфату; для видалення вірусінактивуючих хімічних реагентів; перед заключними етапами афінної хроматографії; встановлено, що за умов підвищеної концентрації солей, змінюються сорбційні властивості кремнеземних сорбентів з лігандами-активними тріазиновими барвниками за рахунок експозиції нових гідрофобних ділянок на поверхні цільових білків; доведено експериментальними дослідженнями доцільність застосування гідрофобної хроматографії для розділення неактивних та активних форм факторів зсідання крові та фібринолізу; для відділення протромбіну від активного тромбіну перевагою за основними показниками серед досліджуваних гідрофобних сорбентів краще проявляють себе фенільні похідні макропористих кремнеземів. Ступінь впровадження: акти впроваджень, доповіді на міжнародних наукових форумах, публікації в науковій літературі. Зареєстровано реєстраційну карту технології. Галузь застосування: центри крові, хіміко-фармацевтичні підприємства, науково-дослідні організації. Ефективність: впровадження результатів запланованих досліджень дозволять вдосконалити створені нами раніше технології одержання діагностичних та лікувальних білкових препаратів з утильних субфракцій переробки донорської плазми крові з використанням попереднього ПЕГ- та сольового фракціонування, біоспецифічної хроматографії на макропористих кремнеземних сорбентах, сольвент-детергентного та тіоціанатного методів інактивації вірусів шляхом введення етапу (етапів) гідрофобної хроматографії. Це дозволить підвищити ефективність процесів, скоротити затрати часу на здійснення технологій, мінімізувати втрати активності досліджуваних ферментів у процесі їх виділення та очищення. Всього за звітний період опубліковано 17 наукових праць, в тому числі 7 статті, 10 тез, в тому числі 6 за кордоном. Результати роботи представлені на 10 міжнародних форумах. ФРАКЦІЇ ПЛАЗМИ КРОВІ ЗА КОНОМ, ГІДРОФОБНІ КРЕМНІЙ-НЕОРГАНІЧНІ СОРБЕНТИ, ФАКТОРИ ЗСІДАННЯ ТА ФІБРИНОЛІЗУ Опис продукції Суть запропонованого нововведення передбачає застосування методу гідролізу хромогенного пептидного субстрату S-2765 для контролю активності FVIII як у різних субфракціях плазми крові так і на різних етапах технології одержання терапевтичного та діагностичного препаратів. Зокрема, розроблена технологія об'єднує наступні етапи: осадження білків протромбінового комплексу (ППСБ) цитратом барію та їх сорбції на гідроксиді алюмінію (ІІІ), відділенням фібриногену, фібронектину та домішкових білків на ПЕГ-4000, іонообмінної (на DEAE-Sepharose) та негативної афінної (з сорбентом Діасорб-амінопропіловий-Активний пурпуровий 4ЖТ) хроматографій та проведенням подвійної вірусної інактивації Автори роботи Вороняк М.І. Даниш О.Й. Даниш Т.В. Деркач С.В. Дульцева Н.А. Мадич С.Є. Орлова Л.В. Рокошевська М.С. Шурко Н.О. Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити