Реєстраційний номер
0218U001552,
0116U002409
, Науково-дослідна робота
Назва роботи
Розробити та обгрунтувати доцільність застосування сучасних нано- та клітинних технологій для підвищення протипухлинної та імуномодуляторної властивостей вакцин на основі дендритних клітин
Назва етапу роботи
Керівник роботи
Храновська Наталя Миколаївна,
Дата реєстрації
22-02-2018
Організація виконавець
Національний інститут раку
Опис етапу
Об'єкт дослідження - фенотипові та функціональні характеристики дендритних клітин (ДК) навантажених нанокомплексами оксиду заліза або PLGA наночастинками. Мета роботи - розробити технології одержання дендритних клітин, навантажених нанокомплексами або ліпосомами, які містять пухлинні антигени, та дослідити їх біологічні властивості. Методи дослідження - методи експериментальної онкології, метод культури клітин, цитофлюориметричні, імунологічні, молекулярно-генетичні, статистичні. Апаратура - проточний цитофлюориметрFACSCalibur, центрифуги ОПН-3, мікроскоп, ваги WPS 600/C та ВТ, флуоресцентний мікроскоп Imager.M1 "AxioZeizz", Німеччина, спектрофотометр NanoDrop 1000, 7500 Real-Time PCR Systems. Розроблено технологію одержання магнітного нанокомплексу (МНК), яка включає механічну обробку ліофілізованих пухлинних клітин та наночастинок (НЧ) оксиду заліза Fe3O4 у мікровібромлині ММVE-0,005. Розроблено методику отримання цитологічних препаратів генерованих ДК, навантажених МНК, та їх забарвлення за методом Лілі. Результати цитологічних досліджень показали, що 100 % ДК мають здатність поглинати НЧ оксиду заліза, і що поглинальна здатність ДК практично здорових людей та онкологічних хворих не відрізняється. Найбільш оптимальна концентрація НЧ оксиду заліза для навантаження генерованих ДК становить 8*10-12 г/мл. Встановлено, що експозиція ДК з НЧ протягом 24 г не впливає на їх життєздатність, зокрема на рівень апоптозу, розподіл клітин за фазами циклу та кількість девіталізованих клітин в культурі. Створено нову протипухлинну вакцину на основі ДК миші та МНК із застосуванням клітин карциноми легені Льюїс (КЛЛ). В експерименті встановлено, що у мишей з КЛЛвнутрішньошкірне введення ДК-вакцини та вплив магнітного поля супроводжувалися найбільш вираженимантиметастатичним ефектом, що виявлялося у значному зменшенні кількості метастазів у легенях мишей порівняно з контрольними групами та деякому зменшенні маси первинної. Комбінований вплив ДК-вакцини та магнітного поля сприяв значному зниженню рівня мРНК IL-4 в селезінці та деякому підвищенню рівня мРНК IFN-?, що може свідчити про поляризацію імунної відповіді за Тх1-типом. Комбінована терапія на основі ДК-вакцини та магнітного поля сприяла зниженню рівня експресії мРНК TGF-? та транскрипційного фактору FoxP3 у селезінці та лімфатичних вузлах, що може розглядатися як один з механізмів, який забезпечує реалізацію протипухлинного ефекту терапії. Розроблено технологію отримання НЧ із сополімерів молочної та гліколевої кислот (PLGA) та лізату пухлинних клітин. Встановлено, що PLGA-НЧ мають розмір від 230 до 370 нм.
Опис продукції
Отримані результати обгрунтовують методичну основу для подальших досліджень вивчення ефективного та безпечного застосування НЧ металів при створені нових клітинних технологій в онкологічній практиці.
Автори роботи
Іномістова М.В.
Скачкова О.В.
Храновська Н.М.
Шумейко І.
Додано/оновлено в НРАТ
2020-04-02
