Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0218U005112, 0116U002209 , Науково-дослідна робота Назва роботи Генетичні та біохімічні аспекти регуляції деяких катаболічних та анаболічних процесів у мікроорганізмів: алкогольної ферментації, катаболізму метанолу, біосинтезу флавінів, гліцерину, водню та глутатіону.ми регуляції автофагії, відповіді на стрес та синтезу біологічно-активних сполук у дріжджів. Назва етапу роботи Керівник роботи Сибірний Андрій Андрійович, Дата реєстрації 01-03-2018 Організація виконавець Iнститут біології клітини НАН України Опис етапу Опрацьовано метод редагування геному CRISPR/Cas9 для дріжджів Candida famata. Додаткова модифікація CRISPR/Cas9 системи полягала у експресії гена CAS9 під контролем регульованого мальтозою промотора гена CfMAL2. Ідентифіковано консервативний транскрипційний фактор Tup1 дріжджів Pichia guilliermondii. Встановлено, що Tup1залучений у регуляцію біосинтезу рибофлавіну та транспорту заліза в клітини. Ампліфіковано та секвеновано ген SFU1 C. famata Сконструйовано касету для делеції гена SFU1, яку буде використано для трансформації у реципієнтні штами C. famata.. Для виявлення лімітуючих ланок синтезу рибофлавіну сконструйовано серію плазмід, що містять структурні гени біосинтезу рибофлавіну RIB1, RIB6 та RIB7, які кодують ГТФ-циклогідролазу ІІ, 3,4-дигідрокси-2-бутанон-4-фосфатсинтазу та рибофлавінсинтазу, відповідно. Встановлено, що поєднання генів RIB1 та RIB6 виявляють найвищий позитивний вплив на продукцію рибофлавіну.З метою конструювання дріжджового продуцента амінорибофлавіну модифікований ген rosB Streptomyces davawensis (кодує N,N-8-деметил-8-амінорибофлавін-5'-фосфат синтетазу, ключовий ген біосинтезу амінорибофлавіну) надекспресовано в штамі C.famata-продуценті флавінмононуклеотиду. Отримано рекомбінантні штами, які здатні до утворення додаткового флюоресціюючого продукту, ймовірно, амінорибофлавіну. Опис продукції Опрацьовано новий метод CRISPR-Cas редагування геному дріжджів З"ясовано, що транскрипційний фактор tup 1 задіяний в регуляції біосинтезу рибофлавіну і постачанні заліза. Сконструйовано касету для делеції гена SFU1, яку буде використанао для трансформації у реципієнтні штами C. famata. C конструйовано серію плазмід, що містили структурні гени біосинтезу рибофлавіну RIB1, RIB6 та RIB7, які кодують ГТФ-циклогідролазу ІІ, 3,4-дигідрокси-2-бутанон-4-фосфатсинтазу та рибофлавінсинтазу, відповідно. Встановлено, що поєднання генів RIB1 та RIB6 виявляють найвищий позитивний вплив на продукцію рибофлавіну.Сконструйовано плазміду, що містить адаптований для C. famata ген rosA S. davawensis (кодує N,N-8-деметил-8аміно-d-рибофлавін диметилтрансферазу). Введення цієї експресійної касети разом з уже створеною касетою TEF1_pr- rosB у дріжджі дозволить змоделювати процес біосинтезу кінцевого продукту цього метаболічного шляху - розеофлавіну. Автори роботи Булботка Н. Василишин Р. Дмитрук К.В. Куриленко О.О. Левків К.О. Петровська Я. Семків М.В. Фаюра Л.Р. Федоренко В.О. Федорович Д.В. Цирульник А.О. Юрків М. Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити