Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0219U000900, 0117U004740 , Науково-дослідна робота Назва роботи Нові полімерні композитні матеріали з комплексною ферментативною активністю, перспективні для використання у терапії ран і опіків в військово-польових умовах і медицині катастроф Назва етапу роботи Керівник роботи Романовська Ірина Ігорівна, Доктор біологічних наук Дата реєстрації 14-03-2019 Організація виконавець Фізико-хімічний інститут ім. О.В.Богатського НАН України Опис етапу Об'єкт дослідження - протеїназа Вacillus thuringiensis з казеїнолітичною колагенолітичною, еластолітичною, фібринолітичною активностями. Мета дослідження - вивчення фізико-хімічних властивостей зв'язаного з полімерними матрицями протеолітичного ензиму. Визначення кінетичних параметрів гідролізу субстратів та збереження активності іммобілізованих препаратів ензиму у часі. Проведення порівняльного аналізу глибини протеолізу білкових субстратів за кількістю розриваємих пептидних зв'язків вільною і іммобілізованими формами протеази. Виділено протеазу з Bacillus thuringiensis var. israelensis ІМВ В-7465 з М.м. 34 кДа. В результаті іммобілізації ензиму в матрицю полівініловий спирт/хітозан отримано препарат з комплексною протеолітичною активністю. Іммобілізована протеаза стабільніша за вільну в лужному і кислому середовищі на 32-35 % та зберігає вихідну казеїнолітичну активність протягом 12 міс. при 4°С. Досліджена кінетика гідролізу казеїну вільною протеазою, проведено порівняльний аналіз методів лінеаризації рівняння Міхаеліса-Ментен з використанням різних методів визначення активності. Встановлено, що метод визначення казеїнолітичної активності з використанням о-фталевого діальдегіду дозволяє визначати NH2-групи продуктів гідролізу білкового субстрату за кількістю розриваємих пептидних зв'язків, тобто найбільш вірогідно виявляти глибину протеолізу вільним ензимом. Виявлено субстратне інгібування активності вільної протеази (Кi 1,30-1,71 г/дм3). Показано, що включення ензиму в матрицю істотно не впливає на Vмакс. гідролізу; Км збільшується в 1,4-2,3 рази в залежності від методу лінеаризації; Кi у випадку іммобілізованого препарату майже втричі перевищує таку вільного. Опис продукції Отриманий плівковий матеріал з іммобілізованою пептидазою з Bacillus thuringiensis var. israelensis ІМВ В-7465 з комплексною (фібринолітичною, колагеназною. еластолітичною) активністю, стабільний протягом 12 міс зберігання в умовах низьких температур. Досліджено фізико-хімічні властивості іммобілізованої пептидази. Іммобілізована пептидаза характеризується підвищеною протеолітичною активністю при кислих (до 35 %) і лужних (до 32 %) значеннях рН порівняно з вільною. Вивчено кінетику гідролізу казеїну пептидазою з Bacillus thuringiensis var. israelensis ІМВ В-7465. Встановлено, що включення ферменту в матрицю істотно не впливає на Vмакс. реакції гідролізу, однак Км збільшується в 1,4-2,3 рази в залежності від методу дослідження. Вивчено субстратне інгібування активності пептидази - Кi, що у випадку іммобілізованого препарату втричі перевищує таку вільного. Автори роботи Є.А. Шестеренко І. І. Романовська Л.Д. Варбанець Н.А. Дзюблюк О.В. Севастьянов Рижак А.А. Ю.А. Шестеренко Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити