Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0219U102065, 0119U103151 , Науково-дослідна робота Назва роботи Структурно-функціональна характеристика дефензинів сосни звичайної як генів-кандидатів для контролю хвороб сільськогосподарських культур Назва етапу роботи Керівник роботи Ковальова Валентина Андріївна, Кандидат біологічних наук Дата реєстрації 17-12-2019 Організація виконавець Національний лісотехнічний університет України Опис етапу  Розроблено протокол для експресії дефензину 2 сосни звичайної у системі pET32/BL21-CodonPlus (DE3)-RIL і отримання цільового пептиду, кон’югованого із тіоредоксином (TRX), у розчинній формі. Встановлено, що найвищий вихід розчинного TRX-PsDef2 досягається за індукції трансформованих клітин 0,5 мМізопропіл-β-D-1-тіогалактопіранозидом (ІПТГ) і культивуванням їх протягом 3 годин при температурі 25 °С. Гібридний протеїн TRX-PsDef2 очищено на HisPurNi-NTA колонці і розщеплено ентерокіназою. PsDef2 виділено із суміші продуктів протеолітичної реакції за допомогою іонообмінної хроматографії на SP-SepharoseFastFlow колонці та ступінчастого градієнту концентрації NaCl (0,05 – 1 М). З одного літра бактеріальної культури отримано один міліграм цільового пептиду чистотою вищою за 95 %. Встановлено, що рекомбінантний пептид PsDef2 володіє активністю щодо фітопатогенного грибів Fusariumsporotrichiella, Botrytiscinerea, Heterobasidionparviporum та ооміцетаPhythophtoragonapodyides за концентрації 5,0 мкМ. Опис продукції Розроблено протокол гетерологічної експресії багатого на цистеїн протеїну у прокаріотичній системі. Оптимізовано умови експресії та очищення рекомбінантного протеїну. Створено конструкти для транзієнтної експресії генів дефензинів сосни у тютюні. Автори роботи Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити