Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0219U102119, 0117U001792 , Науково-дослідна робота Назва роботи Створення засобів для виявлення медичних маркерів на основі флуоресцентно мічених моноклональних антитіл (2.2.5.419; 2.2.5.419/1; 2.2.5.419/2) Назва етапу роботи Керівник роботи Шлапацька Лариса Миколаївна, Кандидат біологічних наук Дата реєстрації 19-12-2019 Організація виконавець Інститут експериментальної патології, онкології і радіобіології ім. Р.Є. Кавецького НАН України Опис етапу  Розроблено підходи для отримання яскравих кон’югатів з флуоресцентним білком PerCP, тандемним барвником PC5 та його вітчизняним аналогом R-PE-ISC-650. Одержання кон'югатів було відпрацьовано на імуноглобуліні G (IgG) та включало в себе модифікацію IgG 2-імінотіоланом та модифікацію PerCP або тандемних барвників за допомогою сукцинімідил-4-(N-малеімідометил)циклогексан-1-карбоксилата (SMCC) з подальшою кон'югацією антитіл (IgG) з флуоресцентною міткою - PC5, R-PE-ISC-650 або PerCP. Встановлено, що збільшення використаної кількості крос-лінкерів при модифікації протеїнів призводить до утворення небажаних агрегатів IgG з флуоресцентною міткою та нерозчинного осаду. Зменшення використаної кількості крос-лінкерів приводить лише до часткового мічення антитіл або до утворення кон'югатів IgG з невеликою кількістю молекул флуоресцентної мітки. Флуоресценція усіх отриманих кон'югатів добре збуджується 488-нм лазером, але у випадку мічення антитіл тандемними барвниками (PC5, R-PE-ISC-650) для їх використання у цитофлуориметричних дослідженнях необхідно одержувати кон’югат при співвідношенні 1:1 кількості антитіл до тандемного барвника, тоді як для отримання аналогічного сигналу для кон’югатів з PerCP необхідно одержувати кон’югат у співвідношенні 1:4-5 кількості антитіл до PerCP. Опис продукції Розроблено методику кон'югації IgG з тандемними барвниками (R-PE-Cy5, R-PE-ISC-650) та флуоресцентним протеїном PerCP, яка може бути використана для отримання кон’югатів із моноклональними антитілами. Найвища яскравість для кон'югатів IgG із PC5 та R-PE-ISC-650 відмічена при співвідношенні 1:1 кількості антитіл до тандемного барвника, тоді як для отримання аналогічного сигналу для кон’югатів із PerCP співвідношення антитіл до PerCP становить 1:4-5. Отримані за допомогою такого методу кон'югати з вітчизняними моноклональними антитілами будуть застосовані для діагностики лейкозів та лімфом, визначення імунологічного статусу при злоякісних новоутвореннях, інфекційних і аутоімунних захворюваннях, а також моніторингу стану імунної системи у осіб з ВІЛ-інфекцією/СНІДом. Автори роботи Кобзев Дмитро Володимирович Татарець Анатолій Леонідович Шлапацька Лариса Миколаївна Щербіна Валерія Михайлівна Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити