Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0220U100488, 0115U004200 , Науково-дослідна робота Назва роботи Моделювання в клітинах дріжджів молекулярних процесів, характерних для хвороби Паркінсона, та аналіз впливу екзо- та ендогенних чинників на процеси агрегації та деградації альфа-синуклеїну людини Назва етапу роботи Керівник роботи Стасик Олег Володимирович, Кандидат біологічних наук Дата реєстрації 20-01-2020 Організація виконавець Iнститут бiологiї клiтини НАН України Опис етапу  Об’єкт дослідження – роль дефіциту аргініну в деградації гетерологічного нейронального білка альфа-синуклеїну у клітинах модельного штаму H. polymorpha. Мета етапу – дослідження молекулярних механізмів деградації аномальних форм альфа-синуклеїну людини в модельного мікроорганізму H. polymorpha за дефіциту амінокислоти аргініну. Методи дослідження – методи флуоресцентного аналізу (детекція химерних форм α-синуклеїну, кон’югованого із зеленим флуоресцентним білком (GFP)); мікробіологічні методи (аналіз кінетик росту модельних штамів); молекулярно-біологічні методи (Вестерн-блот детекція білка α-синуклеїну за допомогою мишачих анти-α-синуклеїнових антитіл); апаратура (камери для електрофорезу білків у поліакриламідному гелі, прилад для напіввологого перенесення білків на нітроцелюлозну або PVDF мембрану; флуоресцентний мікроскоп Microscope AxioScope.A1, шейкер для вирощування культури дріжджів Double Deck Incubator). Результати дослідження – У результаті проведеної роботи вперше було сконструйовано штами метилотрофних дріжджів Hansenula (Ogataea) polymorpha, в яких продукується альфа-синуклеїн людини, мічений зеленим флуоресцентним білком (EGFP). З метою моделювання впливу дефіциту аргініну на процеси автофагійної деградації альфа-синуклеїну, який in vivo може бути створений із використанням аргінін-деградуючих ферментів, у модельного штаму було делетовано ген аргініносукцинатсинтетази. Встановлено, що дефіцит аргініну індукував автофагію в клітинах ауксотрофного модельного штаму та знижував його внутрішньоклітинний вміст, проте не зумовлював повної деградації гетерологічного білка. Таким чином, дефіцит окремих амінокислот може бути використаний для терапії хвороби Паркінсона і дослідження його впливу має бути продовженим на альтернативних лабораторних моделях. Ключові слова: альфа-синуклеїн людини, метилотрофні дріжджі, хвороба Паркінсона, автофагія Опис продукції Для пошуку ефективних підходів терапії хвороби Паркінсона (ХП) вперше сконструйовано штами метилотрофних дріжджів Hansenula (Ogataea) polymorpha, в яких продукується альфа-синуклеїн людини, мічений зеленим флуоресцентним білком. Делеція гену аргініносукцинатсинтетази (фермента циклу сечовини) у модельного штаму дозволила змоделювати вплив дефіциту аргініну, який можна створити за умов in vivo за допомогою аргінін-деградуючих ферментів, на процеси деградації аномальних форм альфа-синуклеїну, який є одним із ключових токсичних факторів в етіології ХП. Автори роботи Вовк Олена Іванівна Маєвська Оксана Михайлівна Стасик Олег Володимирович Додано в НРАТ 2020-04-02 Закрити