Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0220U102649, 0116U002209 , Науково-дослідна робота Назва роботи Генетичні та біохімічні аспекти регуляції деяких катаболічних та анаболічних процесів у мікроорганізмів: алкогольної ферментації, катаболізму метанолу, біосинтезу флавінів, гліцерину, водню та глютатіону Назва етапу роботи Керівник роботи Сибірний Андрій Андрійович, Дата реєстрації 22-04-2020 Організація виконавець Інститут біології клітини НАН України Опис етапу  Опрацьовано метод редагування геному CRISPR / Cas9 для дріжджів Candida famata.Додаткова модифікація CRISPR / Cas9 системи полягала в експресії гена CAS9 під контролем мальтозо-регульованого промотора гена CfMAL2 gene. Ідентифіквано консервативний транскрипційний фактор Tup1 дріжджів Pichia guilliermondii. Встановлено, що Tup1 залучений в регуляцію біосинтезу рибофлавіну і транспорту заліза в клітини. Ген SFU1 C. famata ампліфіковано і секвеновано Сконструйовано касету для делеції гена SFU1, яку буде використано для трансформації реципієнтних штамів C. famata. Сконструйовано плазміди, що містять гени RIB1, RIB6 і RIB7 шляху біосинтезу рибофлавіну, які кодують ГТФ-циклогідролазу II, 3,4-дигідрокси-2-бутанон-4-фосфатазу і 3-дигідрокси-2-бутанон-4-фосфатсинтазу і рибофлавін синтазу , відповідно, для визначення лімітуючої ланки шляху біосинтезу рибофлавіну. Показано, що комбінація генів RIB1 і RIB6 має найбільший позитивний вплив на продукцію рибофлавінуn. Для конструювання продуцента амінорибофлавіну, модифікований ген rosB Streptomyces davawensis (кодуєN, N-8-деметил-8-амінорибофлавін-5'-фосфат синтетазу, головний ген біосинтезу амінорибофлавіну) було експресовано в штамі С. famata, здатному до надсинтезу флавінмононуклеотиду. Отримано рекомбінантні штами, які продукують додатковий флюоресціюючий продукт, можливо амінорибофлавін. Опис продукції Опрацьовано новий метод CRISPR-Cas редагування геному дріжджів З"ясовано, що транскрипційний фактор tup 1 задіяний в регуляції біосинтезу рибофлавіну і постачанні заліза. Сконструйовано касету для делеції гена SFU1, яку буде використанао для трансформації у реципієнтні штами C. famata. C конструйовано серію плазмід, що містили структурні гени біосинтезу рибофлавіну RIB1, RIB6 та RIB7, які кодують ГТФ-циклогідролазу ІІ, 3,4-дигідрокси-2-бутанон-4-фосфатсинтазу та рибофлавінсинтазу, відповідно. Встановлено, що поєднання генів RIB1 та RIB6 виявляють найвищий позитивний вплив на продукцію рибофлавіну.Сконструйовано плазміду, що містить адаптований для C. famata ген rosA S. davawensis (кодує N,N-8-деметил-8аміно-d-рибофлавін диметилтрансферазу). Введення цієї експресійної касети разом з уже створеною касетою TEF1_pr- rosB у дріжджі дозволить змоделювати процес біосинтезу кінцевого продукту цього метаболічного шляху - розеофлавіну. Автори роботи Булботка Ніна Василівна Василишин Роксоляна Олександрівна Гринів Орест Богданович Дмитрук Костянтин Васильович Куриленко Олена Олександрівна Левків Катерина Олександрівна Лизак Олексій Олександрович Лужецький Тарас Богданович Муращенко Лідія Іванівна Рачкевич Назар Олександрович Семків Марта Віталіївна Фаюра Любов Романівна Федоренко Віктор Олександрович Федорович Дарія Василівна Цирульник Андрій Олксандрович Юрків Мар"яна Тарасівна Яковенко Галина Йосипівна Додано в НРАТ 2020-07-03 Закрити