Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0220U103778, 0120U103353 , Науково-дослідна робота Назва роботи Структурно-функціональна характеристика дефензинів сосни звичайної як генів-кандидатів для контролю хвороб сільськогосподарських культур Назва етапу роботи Керівник роботи Ковальова Валентина Андріївна, Кандидат біологічних наук Дата реєстрації 19-11-2020 Організація виконавець Національний лісотехнічний університет України Опис етапу  Об’єкт дослідження – рекомбінантні дефензини сосни звичайної, які отримано гетерологічною експресією у різних системах: їх очистка та біологічна активність Мета - охарактеризувати особливості структури та біологічну активність дефензинів Pinus sylvestris L для ідентифікації функціонально значимих структурних мотивів, які відповідають за протимікробні властивості цих пептидів, для цілеспрямованого конструювання рослин із заданими властивостями. Методи дослідження – мікробіологічні, молекулярно-біологічні, генно-інженерні, біоінформативні, статистичні. Розроблено протокол для експресії дефензину 5.1 сосни звичайної у системі pET32/Rozettagami2 і отримання цільового пептиду, кон’югованого із тіоредоксином (TRX), у розчинній формі. Встановлено, що найвищий вихід розчинного TRX-PsDef5.1 досягається за індукції трансформованих клітин 0,5 мМ ізопропіл-β-D-1-тіогалактопіранозидом (ІПТГ) і культивуванням їх протягом 18 годин при температурі 18 °С. Гібридний протеїн TRX-PsDef5.1 очищено на HisPurNi-NTA колонці і розщеплено ентерокіназою. PsDef5.1 виділено із суміші продуктів протеолітичної реакції за допомогою іонообмінної хроматографії на SP-SepharoseFastFlow колонці та лінійного градієнту концентрації NaCl (0,05 – 1 М). З одного літра бактеріальної культури отримано 0,5 мг цільового пептиду чистотою вищою за 95 %. Встановлено, що рекомбінантний пептид PsDef5.1 володіє активністю щодо низки фітопатогенних грибів, грам-негативних і грам-позитивних бактерій у мікромолярних концентраціях, а також інгібує α-амілази комах. Здійснено транзієнтну експресію дефензинів сосни звичайної у листках тютюну. Екстракти із листків тютюну, що містили дефензини сосни, обмежували ріст фітопатогенних грибів. Опис продукції Автори роботи Додано в НРАТ 2020-11-19 Закрити