Реєстраційний номер
0220U104197,
0120U104114
, Науково-дослідна робота
Назва роботи
Створення дріжджових продуцентів нових флавінових антибіотиків
Назва етапу роботи
Керівник роботи
Дмитрук Костянтин Васильович, Доктор біологічних наук
Дата реєстрації
14-12-2020
Організація виконавець
Інститут біології клітини НАН України
Опис етапу
Для розробки системи мультикопійної інтеграції для дріжджів С. famata використано селективний маркер, ген SAT, що забезпечує резистентність до антибіотика норзеотрицину. Отримано колекцію дріжджових трансформантів на зростаючих концентраціях антибіотику (40, 75, 100, 150 мг/л) в середовищі. Для розробки системи CRISPR-Cas9 сконструйовано серію рекомбінантних плазмід, що містять ген CAS9 під контролем сильного конститутивного промотора гена TEF1 С. famata, гомологічного промотора гена MAL2 та гетерологічного конститутивного промотора гена ENO1 Сandida albicans. Експресію послідовності спрямовуючої РНК (gRNA здійснювали під контролем промотора TEF1, а послідовність gRNA фланкували ділянкою аланінової тРНК з 5’-кінця та послідовністю рибозиму вірусу HDV з 3’-кінця. Отримано дріжджові трансформанти відповідними конструкціями. Проведено адаптацію послідовностей генів rosB та rosА Streptomyces davaonensis для експресії в геномі С. famata. Отримано відповідні синтетичні конструкти. Гени FMN1 С. famata, rosB та rosА S. davaonensis клоновано під контроль промотора гена TEF1 у складі інтегративних плазмід. Ген IMH3 Debaryomyces hansenii клоновано у склад відповідних плазмід. Цей ген забезпечує стійкість до мікофенольної кислоти і буде використаний як селективний маркер для відбору цільових дріжджових трансформантів.
Ключові слова: генна інженерія, дріжджі, Candida famata, розеофлавін, амінорибофлавін CRISPR-Cas9, Streptomyces davaonensis, гени rosB, rosА
Опис продукції
Автори роботи
Андреєва Юлія Андріївна
Дмитрук Олена Валеріївна
Петровська Яна Олександрівна
Сибiрний Андрiй Андрiйович
Фаюра Любов Романівна
Федорович Дарія Василівна
Додано/оновлено в НРАТ
2020-12-14
