Пошук академічних текстів

Інформація × Реєстраційний номер 0220U104395, 0120U103573 , Науково-дослідна робота Назва роботи Ідентифікація генів, що беруть участь у автофагічній деградації розчинних білків у дріжджах та клітинах людини Назва етапу роботи Керівник роботи Сибірний Андрій Андрійович, Дата реєстрації 16-12-2020 Організація виконавець Інститут біології клітини НАН України Опис етапу Розроблено систему селекції рекомбінантних штамів Komagatella phaffii з пошкодженням генів, пов’язаних з процесом автофагійної деградації цитозольних білків. Для цього ген LAC4 Kluyveromyces lactis, що кодує β-галактозидазу [Ishchuk et al., 2008], злитий з флуоресцентною міткою GFP, експресовано під контролем індукованого метанолом промотора гена формальдегіддегідрогенази у штамі K. phaffii GS200 (arg4 his4), а також SMD1163 (his4 pep4 prb1), у якого порушений процес автофагії. Отримані рекомбінантні штами продукували β-галактозидазу під час росту на середовищі з метанолом, а після перенесення клітин на середовище з глюкозою відбувалася деградація цього цитозольного білка. Оскільки у похідних штама SMD1163 спостерігалося повільніше зниження активності β-галактозидази, ніж у похідних штама GS200, можна стверджувати, що деградація рекомбінантного білка відбувається частково шляхом автофагії. На основі сконструйованого штаму GS200/LAC4 було отримано інсерційні мутанти, у яких сповільнено процес деградації β-галактозидази після перенесення на середовище з глюкозою в порівнянні з вихідним штамом. В одного з отриманих мутантів було ідентифіковано сайт інтеграції інсерційної касети – інтеграція відбулася в районі відкритої рамки зчитування гена, що кодує β-1,6-N-ацетилглюкозамінілтрансферазу. Опис продукції Автори роботи Зазуля Анастасія Зіновіївна Семків Марта Віталіївна Додано в НРАТ 2020-12-16 Закрити